mtor信号通路对山羊骨骼肌卫星细胞增殖及分化的影响

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1、学校代码：１０１２６口０８００８学号：２分类号：编号：论文题目ｍＴＯＲ信号通路对山羊骨骼肌卫星细胞増殖及分化的影响学院：生命科学学院专业：动物学研究方向；哺說动物生殖生物学及生物技术姓名：吴海青指导教师：刘东军研究员２０１５年４月１０日原创性声明本人声明：所皇交的学位论文是本人在导师的指导下进巧的研究工作及取得的研巧成，果。除本文己经注明引用的内容外Ｉ论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研巧成果也不包含为获得占塞直去望及其他教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与

2、我同工作的同志对本研兄所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。、｜＼学位论文作者签名：指导獅齡：爭日期！被＇尼７去日期：ｒｉｒ在学期间研究成果使用承诺书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：内蒙古大学有权将学位论文的全部内容或部分保留并向国家有关机构，允、部口送交学位论文的复印件巧磁盘许编入有关数据库进行检索，也可采巧影印、缩印或其他复制手段保存、汇编学位论文。为保护学院和导师的知识产权，作者在学期间取得的研究成果属于内蒙古大学。作者今后使用涉及

3、在学期间主要研巧内容或硏究成果，须征得内蒙古大学就读期间导师的同意ｉ若用于发表论文，版权单位必须著名为内蒙古大学方可巧稿或公开发表。繼如臟诞誦瞧’如￣－＜）日期：＞〇ＪＪ：日期Ｔ内蒙古大学博击学位论文ｍＴＯＲ信号通路对山羊骨骼肌玉星细胞増殖及分化的影响输要骨骼肌分化过程是卫星细胞（ＳａｔｅｌｌｉｔｅｃｅｌｌｓＳＣｓ）退出细胞周期融合成为多，核肌管的过程，这个过程是肌细胞决定因子１（Ｍｙｏｇｅｎｉｃｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ１，ＭｙｏＤｌ）调控肌细胞生成素（Ｍｙｏｇｅｉｉ

4、ｉｉｉ，ＭｙｏＧ）的表达而完成的。同时，肌细胞増强因子２（Ｍｏｃｔｅｅｎｈａｎｃｅｒｆａｃｔｏｒ２ＭＥＦ２）结合于肌肉组织特异性表达基因的调控ｙｙ，区。肌细胞的増殖与分化受到营养、激素和自分泌，增强肌肉组织蛋白的合成因子的影响，（Ｍａｉｒｎｍｌｉａｎ。亮氨酸引发产生的代谢合成信号促使霄帕霉素靴蛋白ｔａｒｅｔｏｆｒａａｍｃｉｎｍＴＯ民）转移到溶酶体表面进而Ｒａｓ蛋白脑组织同源类似物ｇｐｙ，（ＲａｓｈｏｍｏｌｏｅｎｒｉｃｈｅｄｉｎｂｒａｉｎＲｈｅｂ）可Ｗ激活它与此同时，膜岛素样生长ｇ＾；

5、因子１（ｔＩ－２ＩｎｓｕｌｉｎｌｉｋｅｒｏｗｔｈｆａｃｏｒＩ，ＧＦ１）抑制结节性硬化症蛋白复合物ｇ（Ｔｕｂｅｒｏｕｓｓｃｌｅｒｏｓｉｓｃｏｍｐｌｅｘ２，ＴＳ口），导致妃ＴＯＲ释放。激活后的ｍＴＯ民磯酸化其下游的底物，如真核生物翻译起始因子４Ｅ结合蛋白（Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ－ｔ－－ｓｏｍａｆａｃｔｏｒ他ｂｉｎｄｉｎｒｏｅｉｎ１４ＥＢＰ１）和核糖体蛋白１Ｓ６激酶（Ｒ化ｏｌｒｏｔｅｉｎＳ６ｇｐ，ｐ－－ｋｉｎａｓｅｌＳ６Ｋｌ），刺激肌肉蛋白的合成并促使肌肉肥大

6、。同时，４ＥＢＰ１、Ｓ６Ｋ和，蛋白憐酸酶２Ａ（Ｐｒｏｔｅｉｎｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｓ２Ａ，ＰＰ２Ａ）等ｍＴＯＲ底物参与多条信号通路调控骨骼肌的发育。虽然，在骨骼肌发育过程中，目前对于ｍＴＯＲ激活的研究已经比较清楚。但是，其下游通过何种途径来调控ＭｙｏＤｌ和ＭＥＦ２，继而调控骨骼肌相关基因的表达等方面的研究尚未可知。ＩｍＴＯＲ信号通路对山羊骨骼肌卫星细胞増殖及分化的影响在本研究中，首先用两步酶消化法和差速贴壁法分离并纯化山羊骨骼肌卫星细胞（ｇｏａｔＳｋｅｌｅｔａｌｓａｔｅｌｌｉｔｅｃ

7、ｅｌｌｓ，ｇＳＳＣｓ），并对其进行鉴定和诱导分化。结果显示，采用化１％Ｉ型胶原酶和化２５％膜蛋白酶两步消化法可有效分离ｇＳＳＣｓ，Ｐ０代ＳＳＣｓ差速贴壁培养２４ｈ后，有少量细胞贴壁生长；７２ｈ后大量的细胞贴ｇＳＳＣｓ中标记基因Ｄｅｓｍ－ｏＤｌ壁生长。用免疫组化法检测ｇｉｎ、ａｌｐｈａＡｃｔｉｎ、Ｍｙ、生肌调节因子５（Ｍｙｏｇｅｎｉｃｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｆａｃｔｏｒ５，ＭｙｆＳ）和配对盒基因７（Ｐａｉｒｅｄｂｏｘ７ＰＡＸ７）的表达情况，结５个基。成肌诱导，果得到的细胞中送因表达均呈阳性

8、后第Ｉｄ细胞发生聚集生长，第３ｄ时出现细胞融合现象而且融合的细胞折光度－较强。第５７ｄ时形成粗大的化管并有分支出现，且肌管中表达快肌肌球蛋白（ＦａｓｔｍｕｓｃｌｅｍｏｓｉｎＦＭＭ）〇ｙ，Ｗ分离纯化后的泌ＳＣｓ为细胞模型探究ｍＴＯＲ信号通路对ＭＥＦ