不同人源细胞对人细小病毒b19敏感性的鉴定

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1、分类号：Q939.47单位代码：10193密级：公开学号：2012078硕士学位论文不同人源细胞对人细小病毒B19敏感性的鉴定IdentificationonSensitivityofDifferentHumanCellsAgainstHumanParvovirusB19作者姓名：宋婉莹学位类别：理学硕士专业名称：生物物理学研究方向：感染与免疫的分子基础指导教师：赵福广所在学院：生命科学学院2015年6月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个

2、人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农业大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印

3、、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日摘要人细小病毒B19（HumanParvovirusB19，简称B19病毒）是细小病毒科红病毒属的代表性病毒。B19病毒主要在公共场所通过呼吸道进行传播，患病人群具有广泛性，不同国

4、家地区及种族的成人和儿童都有患病的报道。根据近年研究显示，B19病毒在临床上的疾病感染谱较为宽泛，并且胎肝、肾脏、胎盘血管内皮细胞等病灶都能在电镜下观察到B19病毒颗粒。B19病毒也能通过血液及血液代用品、母婴垂直感染等渠道进行传播。正因如此，B19病毒在近年受到了越来越多关注和研究。B19病毒主要是与细胞表面的红细胞糖苷脂（Gb4）结合，红细胞糖苷脂主要存在于骨髓的红系祖细胞表面。虽然B19病毒在临床上的疾病感染谱较为宽泛，但是依然没有找到能有效感染B19病毒的细胞系。现阶段还不能离体分离培养B19病毒，高载量的病毒还依赖于病料血浆/清等来源。目的：

5、以半允许细胞UT-7/EPO作为参照，鉴定不同人源细胞系K562、HL-60、THP-1、Jukat、Huh715细胞对B19病毒的敏感性。方法：首先得到并培养了B19病毒的半允许细胞系UT-7/EPO细胞，调整了细胞状态、摸索了最适的培养条件。筛选了病毒载量大于107copies/mL的病料血浆并进行分型，选取了流行性最广泛的Ⅰ型病毒作为感染源。然后用病料血浆感染不同的人源细胞，并在2h、8h、16h、24h、32h、40h、2d、3d、4d、5d、6d分别取样提取细胞上清及细胞中的DNA、细胞中的RNA（反转为cDNA）进行定量PCR检测。最后根据

6、定量PCR检测结果，对敏感性与半允许细胞UT-7/EPO细胞相当或是更好的细胞进行WesternBlot及免疫荧光（IF）的检测。结果：通过感染细胞上清的检测，证明B19病毒能够吸附在半允许细胞UT-7/EPO的表面，其他的细胞的变化趋势不如UT-7/EPO细胞明显；细胞中DNA及RNA的检测表明，UT-7/EPO细胞对B19病毒有一定的敏感性但转录复制并不活跃，B19病毒未能进入到K562、HL-60、THP-1、Jukat、Huh715细胞；对UT-7/EPO细胞进行WesternBlot及免疫荧光（IF）的检测显示，能产生一定量的蛋白外壳，但是并

7、不能包装形成相应量的病毒子粒。结论：本研究明确了B19病毒半允许细胞UT-7/EPO感染B19病毒的体系以及该细胞感染效率和产生子代病毒子粒的情况。其他5种人源的白血病细胞及肝癌细胞对B19病毒的敏感性远不及UT-7/EPO细胞，说明B19病毒即使在人体内感染效率很高、有很宽泛的疾病感染谱，但是在离体繁殖的过程中受到很多因素的限制。探索并寻找对B19病毒的敏感细胞系将对研究B19病毒的在细胞内的复制周期、细胞内氧化应激及内质网应激、RNA转录图谱等的作用机制有很重要的意义。关键词：人细小病毒B19，人源细胞，敏感性AbstractHumanParvov

8、irusB19(referredtoasB19virus)isarepresentativeo