天然本草中抗淀粉样蛋白聚集成分的筛选与挖掘

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1、分类号：单位代码：１０１４０密级：公开学号：４０３１５３１８６８◎ＬＩＡＯＮＩＮＧＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ硕士学位论文ＴＨＥＳＩＳＦＯＲＭＡＳＴＥＲＤＥＧＲＥＥ天然本草中抗淀粉样蛋白聚集成分论文题目：的筛选与挖掘Ｓｃ－ｒｅｅｎｉｎａｎｄＥｘｃａｖａｔｉｏｎｏｆＡｎｔｉａｍｌｏｉｄＡｒｅａｔｉｏｎｇｙｇｇｇＣｏｍｏｎｅｎｔｓｉｎＮａｔｕｒａｌＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ英文题目：ｐ论文作者：刘俊清指导教师：何剑为教授生物化学与分子生物学专业：完成时二〇

2、一八年五月间：辽宁大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下独立完成的。论文中取得的研究成果除加以标注的内容外，不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，不包含本人为获得其他学位而使用过的成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均己在文中进行了标注，并表示谢意。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：列ｆ襄４年ｒ月：＾曰学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有

3、关部门或机构送交学位论文的原件、复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅。本人授权辽宁大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。同时授权中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国博士学位论文全文数据库？》和《中国优秀硕士学位论文全文数据库》并通过网络向社会公众提供信息服务。学校须按照授权对学位论文进行管理，不得超越授权对学位论文进行任意处理。保密（），在年后解密适用本授权书。（保密：请在“”Ｖ括号内

4、划）授权人签名：爹：！靖指导教师签名０＾Ａ日期：＞１？年ｆ月外日日期：年｝月曰辦？申请辽宁大学硕士学位论文天然本草中抗淀粉样蛋白聚集成分的筛选与挖掘ScreeningandExcavationofAnti-amyloidAggregationComponentsinNaturalMateriaMedica作者：刘俊清指导教师：何剑为教授专业：生物化学与分子生物学答辩日期：2018年5月二○一八年五月·中国辽宁摘要摘要蛋白质淀粉样疾病属于蛋白质错误折叠疾病，常见的淀粉样疾病包括阿尔茨海默症、二型糖尿

5、病、可传播海绵状脑病、帕金森病等。由于蛋白质在形成其天然构象过程中发生错误折叠，导致淀粉样纤维沉积，诱发了诸如此类的疾病；因此这些疾病又可以统称为蛋白质构象疾病。不幸的是对该类疾病的治疗，目前仍无特效药物。有一种治疗方案是通过对蛋白质成纤维的各个阶段进行干涉或抑制，从而阻止或延缓蛋白寡聚物及纤维的形成，达到防控乃至治疗该类疾病的目的。前期研究表明，单黄酮如杨梅素、桑色素，能对鸡溶菌酶的成纤维过程产生抑制作用。一方面本研究基于这些单黄酮小分子的结构共性，进行扩大化研究，以发掘其衍生成分如穗花杉双黄酮是否具有相似功效。实验利

6、用荧光检测结合计算机模拟对接等方法，发现穗花杉双黄酮同样能抑制鸡溶菌酶成纤维，但其抑制能力较单黄酮稍弱。另一方面，由于蛋白淀粉样纤维常在心脑血管、神经、肾脏等部位形成沉积，导致相关器官功能的衰退；基于我国中草药资源丰富的优势，可以从抗心脑血管疾病的药物中筛选对淀粉样蛋白成纤维有抑制作用的药物，并挖掘其中的有效抑制成分。本实验从众多中草药中选取了三七、山茱萸、丹参、红花、藏药绿萝花、雪茶、辣木籽作为原料,并以不同的方法对其中的天然产物进行提取。成纤维实验是以经典淀粉样蛋白模型鸡溶菌酶为研究对象，发现三七、绿萝花、雪茶等的提

7、取物，均可有效抑制淀粉样纤维的形成，并呈现为剂量依赖性；其中以雪茶提取物的效果最佳。实验提及的不同提取方法中，又以雪茶水提物效果更好，其IC50值约为0.018mg/mL。应用液质联用技术，可大致确定雪茶水提物中有效成分的分子量；然而其结构的最终确定，仍有待进一步研究。抑菌实验结果表明，以水为溶剂的雪茶水提物储液，浓度高达5mg/mL时，不会对OD值为4时的重组菌产生明显的抑菌作用。细胞水平的实验中，选取能表达淀粉样蛋白突变体的毕赤酵母做为处理对象。结果表明，雪茶水提物能够具有浓度依赖性的抑制鸡胱抑素淀粉样突变体I66Q

8、在胞外形成聚集体。当药物浓度达到1.5mg/mL时，会对蛋白的分泌产生一定的抑制作用，但药物具体的I摘要胞内作用机制仍有待探讨。综上，本研究基于前期研究发现的化合物结构共性，进行了主体结构和衍生结构化合物的初步筛选，发现化合物主体结构对其抑制成纤维能力至关重要；另一方面，在继续挖掘天然产物小分子的尝试中，我们鉴定出了