急性操作胁迫对刀鲚（coilia nasus）应激反应的影响

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1、硕士学位论文题目：急性操彳乍胁迫对刀絡应激反应的影响作者：五主指导教师：林浩然院：专业：水产养殖学时间：二〇一五年五月EffectsofacutehandlingstressonCoilianasusAThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementFortheMasterDegreeinAquacultureByWangYuSupervisor:LinHao-ranMajor:AquacultureSubmittedtime:May,2015海南大学学位论文

2、原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。学位论文版权使用授权说明本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。学校可以为存在馆际合作关系兄弟髙校用户提供文献传递服务和

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4、为手工操作容易受伤死亡，导致其人工繁殖过程遭受巨大的损失。为深入了解刀鲚急性胁迫下容易死亡的机理，探索有效的缓解方法，本研究首先通过放射免疫测定法测定急性操作胁迫对刀鲚头肾和血浆皮质醇含量的影响，利用同源克隆的方法获得刀鲚促肾上腺皮质激素释放激素（、硬骨鱼紧张肽（、阿黑皮素原（基因的部分序列，并应用实时荧光定量方法检测上述神经内分泌因子相关基因在急性操作胁迫前后的表达变化；然后，通过高通量测序技术分析对照组（相对抗应激组（及敏感组（之间表达谱的差异，筛选个差异表达显著的基因进行荧光定量验证，鉴定可能与抗应激相关的

5、分子标记；最后测定刀鲚在不同浓度胁迫缓解剂供体或。盐度条件下，急性操作胁迫对皮质醇、游离甲状腺素（和丙二醛水平的影响，分析不同浓度及盐度条件对刀鲚应激反应的缓解作用，并利用刀鲚仔鱼前期及肝脏原代细胞为模型，深入探索对缓解刀鲚应激反应的机理。取得的主要研究成果如下：刀鲚急性操作胁迫后血浆及头肾的皮质醇含量显著性升高，而脑部、的表达水平显著性下降（，基因的表达水平有下降趋势但不显著，证明皮质醇、、、等神经内分泌因子通过鱼类下丘脑一脑垂体一肾间组织轴参与刀鲚应激反应的调节。通过高通量测序，发现刀鲚受应激刺激后，敏感组共

6、有个基因上调表达，个基因下调表达；相对抗应激组共有个基因上调表达，个基因下调表达；验证了可能与相对抗应激相关的位点个和位点个。进一步抽取个应激相关的差异表达基因进行荧光定量验证，结果显示与测序的结果相一致。表达基因的分类结果显示，敏感组与对照组相比，具有个与甲状腺激素调节功能相关的富集，其中包含大量与甲状腺激素调控相关的而相对抗应激组与对照组相比，未发现这些与甲状腺激素调节功能相关的表明刀鲚对急性操作应激的敏感程度可能与甲状腺信号通路相关。在或。盐度水环境下进行急性操作胁迫后的刀鲚与无缓解剂对照组相比，存活率较高

7、，皮质醇或血浆的变化较平稳，而且肝组织丙二醛含量较低，表明在及。盐度可维持正常的甲状腺通路代谢水平，降低应激造成的肝组织脂质氧化水平，从而有效缓解应激效应。刀鲚仔鱼激光共聚焦成像结果显示，在促氧化剂）条件下（模拟氧化应激环境），仔鱼在条件下相对活性氧含量较低，表明该条件有利于缓解仔鱼氧化应激。刀鲚肝脏原代细胞相对活性氧含量及激光共聚焦成像结果表明细胞在条件下有利于缓解引起的活性氧升高，而在条件下易造成氧化应激反应过度。关键词：刀鲚；急性应激反应；；；高通量测序；一氧化氮AbstractTheCoilianasus

8、isoneofthemostimportanteconomicfishes.However,thecaptureproductionofC.nasushasbeendiminishingtheseyears,becauseofthewaterpollution,over-fishing,coastalconstructionandmanyothercomplexfacto