流产衣原体mip蛋白的双抗原夹心elisa诊断方法建立及单克隆抗体制备

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1、密级:论文编号：中囯农业科学院学位论文流产衣原体MIP蛋白的双抗原夹心ELISA诊断方法建立及单克隆抗体制备EstablishofDoubleAntigensSandwichELISABasedonChlamydiaabortusMIPandPreparationofMonoclonalAntibodies硕士研究生：蔺俊丽指导教师：周继章副研究员申请学位类别：兽医硕士专业领域名称：兽医培养单位：兰州兽医研究所研究生院2015年5月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中

2、特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料5与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：戈崎时间：謂J年J月((日关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或

3、部分内容。研究生签名:商姻中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目流产衣原体MIP蛋白的双抗原夹心ELISA诊断方法建立及单克隆抗体制备动物疫苗与论文作者蔺俊丽专业研究方向分子免疫学指导教师周继章培养单位（研;究所）兰州兽医研究所硕（博）姓名职称单专业签名导师评硕导口西北农林科技大学于三科教授预防兽医学博导5/阅硕导以人涂亚斌教授哈尔滨兽医研究所预防兽医学博导口答辩主席硕导口魏锁成教授西北民族大学预防兽医学博导CL/硕导口杨孝朴教授甘肃农业大学预防兽医学博导以硕导口魏锁成教授西北民族大学预防兽医学博导P答硕导口景

4、涛教授兰州大学医学博导S/辩硕导口中国农业科学院兰州蔡建平研究员预防兽医学博导兽医研究所委硕导口中国农业科学院兰州朱启运研究员预防兽医学博导□/兽医研究所员硕导口中国农业科学院兰州刘光远研究员预防兽医学博导E/兽医研究所硕导口中国农业科学院兰州刘永生研究员预防兽医学会议记录（秘书）论文答辩时间地点2015年5月13日于兰州兽医研究所综合楼五楼会议室密级:论文编号:中国农业科学院学位论文流产衣原体MIP蛋白的双抗原夹心ELISA诊断方法建立及单克隆抗体制备EstablishofDoubleAntigensSandwichELISAB

5、asedonChlamydiaabortusMIPandPreparationofMonoclonalAntibodies硕士研究生：蔺俊丽指导教师：周继章副研究员申请学位类别：兽医硕士专业领域名称：兽医培养单位：兰州兽医研究所研究生院2015年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationEstablishofDoubleAntigensSandwichELISABasedonChlamydiaabortusMIPandPreparationofMono

6、clonalAntibodiesM.S.Candidate：LinJun-liSupervisor：AssociateProf.ZhouJi-zhangDegree：MasterofVeterinarianSpecialty:VeterinaryMay2015摘要流产衣原体（Chlamydiaabortus，C.abortus）是一种严格细胞内寄生的革兰氏阴性细菌，可感染妊娠母畜导致流产、死产或者弱胎等；也可引起公畜发生睾丸炎、尿道炎等症状；孕妇与感染的动物直接接触也会造成流产及全身感染等症状，因此流产衣原体是一种重要的人兽共患病

7、病原。巨噬细胞感染增强蛋白（MacropHageInfectivityPotentiator，MIP)是一种脂蛋白，作为一种免疫显性抗原，参与衣原体感染，引起炎症反应等过程。本研究以MIP为研究对象，利用GenBank已公布的序列，设计引物，PCR扩增得到MIP蛋白的编码基因，经过酶切、连接、转化将其插入原核表达载体pET30a（+），成功构建表达载体pET-mip并转化入E.coliBL21(DE3)中诱导表达，经SDS-PAGE分析可见在27kD处出现特异性条带，表明插入的mip基因成功表达；Western-blot特异性实验

8、验证表达的MIP蛋白具有反应原性。以纯化的MIP蛋白做为包被抗原，HRP标记的MIP蛋白为酶标抗原，最适包被浓度为2.5μg/mL，血清最佳稀释度为1:100，建立双抗原夹心ELISA方法。建立的双抗原ELISA与IHA相比，敏感性高，符合率为89