矮牵牛phidl基因的克隆及遗传转化研究

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1、分类号Ｓ６８８学号班０１２１扮５－四川巧业大学硕ｄｔ学位论文矮牵牛Ａ化基因的克隆及遗传转化研究古明红指导教师巧凌霞副巧授学科专业风景园林学研究方向园林植物培育与应用２０１５年５月Ｃｌａ巧ｎｕｍｂｅｒ：Ｓ６８８Ｓｔ；ｕｄｅｎｔ打ｕｍｂｅｒ：Ｓ２０１２１８２５ＳｉｃｈｕａｎＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｉｔｇｙＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮＳｕｂｍｉｔｔｅｄｉｎＰａｒｔｉａｌＦｕｌｆｉｌｌｍｅｎｔｏｆｔｈｅＲｅｕｉｒｅｍｅｎｔｆｏｒｑＭＡＳＴＥ民ＤＥＧＲＥＥＳ

2、ｔｕｄｉｅｓｏｎｔｈｅｃｌｏｎｉｎａｎｄｅｎｅｔｉｃｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｇｇｏｆＰｈＩＤＬｇｅｎｅｉｎＰｅｔｕｒｄａｈｙｂｒｉｄａＢｙＧｕＭｉｎｇｈｏ打ｇＤｉｒｅｃｔｅｄｂＰｒｏｆ．ＳｕｎＬｉｎｘｉａｙｇＳｉｃｈｕａｎＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔＣｈｅｎｄｕ６１１１３０ＳｉｃｈｕａｎＰ．Ｒ．Ｃｈｉｎａｇｙ，ｇ，，Ｍａ２０１５ｙ，论文独削性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果，除了文中特别加Ｗ柄注和致谢的地方外，。尽

3、我所知学位论文中不包含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学一位或证书所使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名；斗淹則年ｒ月曰关于论文使用授枚的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表。、传播学位论文的全部或

4、部分内容。，在过本论文不保密。□本论文保密＿＿年解密后适用本授权＂＂（请在Ｗ上□内划Ｖ）－！研究尘塞名；１＾社＊年ｒ月文円Ｉ＾导师签名：和糾戶月Ｖ円摘要器官脱落（ｏｒｇａｎ油ｓｃｉｓｓｉｏｎ）是指植物体的部分器官（花、叶、果等）脱离母体的生理一一一ａｂ过程。脱落般发生在个可预知的、由特殊形态细胞组成的部位离区（ｓｃｉｓｓｉｏｎ一ｚｏｎｅ。离区的激活直都是植物器官脱落研究的焦点，拍Ｍ基因是离区激活的必需）基因。目前在拟南芥中已经明确的花器官脱落信号转导途径是公ｏｐ／／公＾化４￡／月沈２一一花器官脱落。基因己经在拟南

5、芥、番茄、烟草、大豆进行了克隆和相应的功能研究，但在矮牵牛中还未见报道。本研究成功从矮牵牛花中分离克隆出了／ＺＭ基因，命名为ｆ／ｚ／ＤＬ，主要结果如下：１．利用ＥＳＴ数据库中矮牵牛的已知的序列设计引物，通过反转录分离克隆了？一巧組）Ｚ基因，戶ＷＤＺ基因全长为３８１ｂ．其中包括个完整的开放阅读框为２７０ｂｐ，ｐ＇’＇编码８９个氨基酸，全长序列还包括５非编码区（５ＵＴＲ）长度１５ｂｐ，３非编码区（３ｎｊＴＲ）长度为９４ｂｐ。ＮＣＢＩ库中的氨基酸序列，经比对发现：该序列与茄科烟草（ＭｃＷｆｗｊａ的‘ｗｅ内番茄大丑（Ｇ７＿ｙｃｚ

6、ｎｅｗａｘ）和毛果杨（戶ｏｐｗ／ｗ＊且氨基酸长度相似的如（期巧６２％、４９％、４０％、４２／〇。崎的同源性分别为，２．：ＰｈＩＤＬ蛋白分子式为Ｃ４３６Ｈ６８ｉＮ？ｉ〇ｉ２７Ｓｉ〇，该蛋白质的理论分子量为９８３０．４，－８．８ＧＲＡＶＹ．９９ｉｎｔｉｌｉｉｎｄｅｘ等电点脚伪，总平均疏水指数为０１，不稳定系数（ｓａｂｔｙ）为（）一５９．８２４．０５，推测该蛋白质是个不稳定的蛋白。该蛋白疏水性最大值约为２傅个氨－－％位．８，１５基酸，最小值约为２４１１（第５个氨基酸）其中第氨基酸区域的疏水区域比）一５－较明显，该蛋白有，。在第１３４位

7、氨基酸处个跨膜区与疏水性区域相称。该蛋白的亚细胞定位于细胞核内（ｎｕｃｌｅａｒ）。该蛋白的二级结构预测结果表明含３２．５８％ａ螺旋，一１５．７３％Ｐ折叠，６．７４％Ｐ转角，４４．９４％的无规则卷曲，是种混合型蛋白。该蛋白不。，为非分泌性蛋白存在信号肤；憐酸化位点预测表明Ｐｈ田Ｌ具有６个磯酸化位点兴》心１３．成功构建植物双元表达载体２化９２３５５，用冻融法将其导入农杆菌ＧＶ３０１菌株。经卡那Ｋａｎａ，通过农杆菌介导遗传转化野生型烟草和拟南芥（）抗性筛选和ＰＣ民。检测，己经成功获得转基因植株关键词：矮牵牛；器官脱落；基因克隆；遗传

8、转化ＩＡｂｓ化ａｃｔＯｒａｎａｂｓｃ