苯酚降解中度嗜盐菌群结构及代谢和耐盐分子机制

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1、＇山研…字料专业：兰．环境微生物技术研究方向论文作者：莖刘勇弟教授指导教师；诗：半：扩‘梦扣：式＇二苦２〇巧１０月２８日：年定稿日期＿＿学位论文使用授权声明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华东理工大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或巧描等复制手段保存和汇编学位论文。保密论文在解密后遵守此规定。论文涉密情

2、况：＾因不保密□保密，保密期（年月至月日）＿＿＿日＿年＿＿＂主＇＾学位论文作者签名：；指导老师签名车１－＜ｉ＇日期ｃ＾）年〇；＞＾尸年八月乂日日親月巧日分类号；密级：＾ＵＤＣ：华东理工大学学位论文苯齢降解中度嗜盐菌群结构及代谢和耐盐分子机制黄中子指导教师姓名；刘勇弟教授资源与环境工程学院申请学位级别：博±专业名称＝环境科学与工程２０１５８２０１０２７円论文定稿Ｈ期；年９月円论文答辩円期＝巧年月学位授予单位：华东理工大学学位授予Ｆ：１

3、期答辩委员会主席：陈银广教授评阅人：陈银广教授唐鸿志教授刘燕教授黄民生教授林匡飞教授作者声明我郑重声明；本人恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所化得的结果。除文中明满注明和引用的内容外，本论文不包含任何他人已经发表或撰写过的内容。论文为本人亲自撰写，并对所写内容负责。论文作者签名：年月円华东理工大学博±学位论文第Ｉ页苯齡降解中度嗜盐菌群结构及代谢和耐盐分子机制摘要本论文Ｗ离盐条件下的苯酪降解为目标，通

4、过从含盐生境中筛选和驯化获得具有、髙效降解功能的嗜盐菌稍和菌株，对菌群结构菌株鉴定、降解特性、代谢途径和耐盐机制等方面进行了研究。论文研究结果对说明中度嗜盐菌多样性及其环境效应具有重要意义，为高盐苯酪废水的生物处理和受苯酪污染盐环境的生物修复技术提供参。考研究结果主要分为四部分：一第，，Ｗ不同盐度和苯敢浓度作为筛选压力对采自青海察尔汗盐湖的沉积物样－ｌ品进行富集培养和驯化，得到了能够在１３ＭＮａＣ的盐度范围内生长，并Ｗ苯敢作为一唯碳源进行有效降解的中度嗜盐菌群，且菌群对苯酶的降解能力随盐度增大而

5、逐渐下降，，降解时间也随之延长。通过近６０ｄ的连续驯化富集菌群的苯酶降解速率和苯齡耐受浓度显著增加，最高可在６ｄ内将３５０ｍｇ化的苯酪几乎完全降解。该菌群的停滞期较短，培养１２ｈ内进入对数生长期，在对数期菌群对苯酪的降解速率与菌群生长量均呈线性増长，培养５２ｈ后进入静止期。考察了不同接种量和添加营养物等因素对菌群生长和苯酪降解效果的影响，，菌群对苯酌的降解效果最好当接种量为１０％时；添加微量的酵母膏可Ｗ刺激菌群生长，且显著提高菌群对苯酪的降解率。第二，采用分子生物学手段考察了上述中度嗜盐

6、菌群的种群结构及其对苯酪的代谢途径－ＤＧＧＥ和克隆文库法分析不同盐度下的菌群结构组成及优势菌种之。通过ＰＣＲ间的系统发育关系，结果揭示出该菌群中的优势菌种分属于和ＣＷ’ｏｒ如ｅｘｚ两个类群，这两个类群也是该菌群中对苯酌起主要降解作用的功能菌群。它－３Ｍａ们分布于１盛度的样品中，ＮＣｌ盐度变化对菌群演替无显著影响。通过检测编码苯酪代谢过程中关键酶的基因序列，发现该菌群对苯酪的代谢途径包括苯ｍ哲化酶的－双加氧酶和２３－双加氧酶催化的芳香环的邻位和间位裂解途初始氧化Ｗ及邻苯二酪１，２，。径，表明该

7、菌群降解苯龄的基因多样性－第三，建立了深孔板酶标仪高通量筛菌体系，对上海浦东新区紧邻东海海滨的老港垃數填埋场受垃圾渗滤液污染的±壤样品进行筛选，最终从近３００个克隆中得到２株苯嚇降解效果最好的菌株ＭＳ－，经１６ＳｒＲＮＡ序列分析鉴定为防皆说ｓｐ．ＰＤＢＦ２和ｃ－Ｇ公ｒａ炒似如Ｗｓｐ．ＰＤＢ１。考察了上述菌株的苯嗽降解特性，ｙ？及苯酪浓度、曲浓－－度、温度、ｐＨ、不同盐类等因素对苯龄去除效果的影响。菌株ＰＤＢＧ１和ＰＤＢＦ２能在－－５％１５％的瑞度范围内有效去除５００ｍｇ／Ｌ的苯齡，其中当总盐度

8、为８％时，ＰＤＢＧ１和－ＰＤＢ－Ｆ２分别能耐受浓度高达２００００ｍ／Ｌ１和１４ｇ的苯惭。培养温度和阳对菌株ＰＤＢＧ１－－Ｆ２的生长和苯酪降解率均有较大影响－Ｆ２的最佳降解温和ＰＤＢ，ＰＤＢＧ１和ＰＤＢ度均第ＩＩ页华东理工大学博±学位论文’２＋Ｃ－－７为３０．５。Ｃａ，最