三株枯草芽孢杆菌体外降解饲料蛋白的差异及编码蛋白酶基因的分析

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1、＞Ｖ．，，。－Ｖ－、０９３９９４；Ｓ８２８学号５２０節３５分类号．—－々．，，二＇又一／＾四川农业大学＊心＾＾硕壬学位论文＝株巧草芽跑杆菌体外時解饲料蛋白的差异及编码蛋白酶基因的分祈＼－ｆ／：子＇＇，皆’—＾？＇／＇？王嘉妮＿’＇－技＇．—、、３．——、？‘＇＇主、指导教师；能焰教授？＊？－ｉ，、－学科专业：预防兽医学、、、、、’－、？．■户．？’，’‘、Ｖ研究方向：动物微生物与免疫学

2、＼、、．．？－？、咬‘、、；Ｖ：＼‘：＂＂、？？Ｐ■■、＼：—．■一．．＇＇＇一、＇－＼？．？＞ｉ．｝－％，？＇２０巧年６月—－ｒ．．‘．＊一－ｆ，－，－、Ｚ二‘ｉ．．．产、——－ｒ、ＳｉｃｈｕａｎＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｇｙＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ＊ＳｕｂｍｉｔｔｅｃＨｎａｒｔｉａｌｆｕｌｆｉｌｌｍｅｎｔｏｆｔｈｅｉｅｉｒｅｍｅｎｔｆｏｒｐｑｕＭａｓｔｅｒｄｅｒｅｅｇＡ田ａｌｙｓｉｓｔｈｅｄｉ

3、ｆｆｅｒｅｎｃｅｓｏｆｖｉｔｒｏｆｅｅｄｐｒｏｔｅｉｎｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎａｎｄｒｏｔｅａｓｅｅｎｅｓｅｎｃｏｄｉｎｏｆｔｈｒｅｅｐｇｇ度ａｃＷｉｉｓｓｍＡ说ｉｓｓｔｒａｉｎｓｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｏｕｒｃｅｓＢｙＪ－ｉａＮｉＷａｎｇＤｉｒｅｃｔｅｄｂｙＰｒｏｆ．ＹａｎＸｉｏｎｇＪｕｎｅ２０１５．■＿Ｉ论文独御巧汚明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加糾示注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体己经发表或

4、撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它一教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。＾研巧生签名：王＾备文＾年月处日关于论文使用授巧的寅明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，、Ｊ、汇编学位论文。同意四川农业大学可可ｔ＾＾采用影印缩印或扫描等复制手段保存Ｗ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。■■＜研巧生签名：王＞狂年《月４日导师签名

5、入０／＾年《月曰摘要枯草芽抱巧菌是重要的益生菌饲料发酵剂菌种，而不同种动物肠道内枯草芽抱杆菌在降解饲料蛋白能力上的差异及编码降解蛋白酶基因有何特点，是值得深入研究的课题。它有助于我们了解枯草芽抱杆茜在不同动物肠道中的生长活力、蛋白酶活力和酶结、。构稳定性，这对开发应用于猪禽和水产养殖的微生物制剂有着重要的意义本研巧选用从本实验室己分离筛选到的王株性状优良且不同来源的枯草芽袍杆菌（分别是鱼源Ａ７株、猪源Ｈ６株和鸡源Ｓ１株）。通过单因子试验设计优化种子培养基，确Ａ‘’°７株、Ｈ６株和Ｓ１株的最佳培养温度是２８Ｃ、３７Ｃ和３９ＣＨ值定了，及最佳培养

6、ｐ是ｐＨ７．０、ｐＨ７．０和ｐＨ６．８。采用正交设计对茜株固体发酵培养基进行优化试验，确定了Ｈ株茜株的最佳固体发酵条件均为：装料量４０ｇ／２５０ｍｌ、接种量５％和固体发酵时间４化。在上述最佳固体发酵条９ｉｇｘｘ件的基础上制作菌粉〇ＣＦＵ／Ｈ６．，Ａ７株菌粉中活菌数可这８．９〇ｌｇ，株可达５６〇１〇ｉ０ＣＦＵ／和Ｓ１株可达６．８〇ｘｌ〇ＣＦＵ／ｇ，Ｈ种菌粉中芽抱率均在９０％左右。茜株保存期内的ｇ复活试验结果显示，Ａ７株在保存期内复活效果最好，Ｈ６株次之，Ｓ１株最差。Ａ７菌株的９ｘ复活率和芽抱率均较稳定，至保存期３月，Ａ７株菌粉含菌量为６．３４：ｌ０Ｃ

7、ＦＵ／ｇ，芽抱含量９’ｘ为５．１３ｌ〇ＣＦＵ／ｇ，菌粉中芽抱率仍巧到８０％Ｗ上，芽抱复活率为７０６％，，且菌粉于４Ｃ条件下保存比相同环境常温保存更稳定。菌株降解蛋白能力试验结果显示，Ａ７株＞齡株＞３１株。Ｈ６株和Ｓ１株降解蛋白能为相似，且Ｓ１株降解酪蛋白能力最差。饲料样本经粗酶液酶解后，Ａ７株试验组豆化和玉米粉的降解率分别可达：５３．１３％和１１．１７％，比对照组提富了１７．６４％和７．４９％；对豆稍和玉米粉的蛋白水解度（ＤＨ）为可达：２８．０６％和１７．３１％，比对照组提高了