三种药用石斛代谢谱的初步构建与分析

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1、．单位代巧：１０３６斗分类弓：‘２４学弓：口７２０４密级；么化Ａ义孝学位论文＝种药用石解代谢谱的初步构建与分析＊Ｔｈｅｒｅｌｉｍｉｉｉａｉｃｏｎｓｔｍｃｔｉｏｎａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｏｎ化ｅｍｅｔ：ａｂｏＨｃｐｙｒｏ打Ｈｎｏｆｔｈｒｅｅｍｅｄｉｃｉｎａｌｄｅｎｄｒｏｂｅｓｐｇ研究生；孙时伟指导教师；金青教授合作指导教师：高致明教投申请学位口类级别：巧举硕ｉｒ专业名称；遗传学：植物代谢研究方向所

2、在学院：牛命科学举院弓义答辩委员会主席；衣年月日独创性声明本人声明所呈的学位论文是本人在导师指导下进行的研巧了作及取得的硏究成果。据我所知，除了文中特别加标注和致谢的地方夕ｈ论文中不包當其他人己经发表或撰写过的研巧成果，也不包含为获得安徽农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我…－－同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名，巧：夺１签字日期：山巧年＾：月／日学位论义版极使用授权书本学位论文作者

3、完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部ｎ或机构送交论文的复印件和电子文件，允许论文被盤阅和借阅。本人授权安徽农业大学可从将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，收录到《中国学位论文全文数据库）），可仪、采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，向社会公众提供信息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）。学签字位论文作者签：名：茹、刊指导教师签名：／、扛名日朔；如Ｓ年《巧／日签字日期：２〇／５年公月Ｉ日工学位论文作者毕业

4、后去向；通作单位：电巧：信地址：邮编：ｉ本论文得到了以下科研项目的资助：安徽省科技攻关项目（1301032139）安徽省生物学重点学科建设项目大别山区农林特色产业创新中心安徽省中药材产业体系摘要本文建立了三种药用石斛GC-MS样品制备方法，运用该方法对三种药用石斛试管苗、栽培苗以及石斛加工品枫斗进行分离鉴定，并采用多元统计学方法对数据进行处理与分析，目的是通过研究石斛中糖、醇、有机酸、氨基酸等代谢产物的组成及含量变化，初步构建石斛的代谢谱，并获取对供试样品分型贡献值较大的

5、代谢物信息（VIP），结合统计学t检验P值（P<0.05），找出生物标志物，可作为石斛品种鉴定与质量控制的依据之一。实验建立了药用石斛甲醇/水相的代谢谱分析技术平台，为深入研究石斛药用成分的代谢提供了重要的技术手段。主要的实验结果如下：1、基于气相色谱与质谱联用（GC-MS）技术，对石斛样品甲醇/水相提取物制备方法进行了优化，结果为：超声30min，肟化时间120min，肟化温度37℃,肟化试剂（盐酸羟胺）用量60µL，衍生化时间90min，衍生化温度25℃，衍生化试剂（99%BSTFA+1%TMCS）用量60

6、µL。2、石斛样品甲醇/水相提取物主要为糖类和糖苷类、氨基酸类、脂肪酸类、有机酸类、糖醇类等，氯仿相提取物主要为烷烃类、脂肪酸类、烷醇类等。3、三种药用石斛甲醇/水相提取物代谢谱分析结果如下：（1）在不同品种的石斛试管苗茎（铜皮石斛、铁皮石斛、米斛）中，总含糖量的高低为米斛>铁皮石斛>铜皮石斛，总氨基酸含量也有差异，分别是铁皮石斛>铜皮石斛>米斛。（2）在一至三年生栽培铁皮石斛茎中，总的氨基酸含量变化明显，分别是一年生>两年生>>三年生；在一至四年生栽培米斛茎中，总氨基酸含量三年生茎中最高；比较不同品种栽培石斛

7、，总糖类差异明显，为栽培米斛>>栽培铁皮石斛。（3）在不同品种的石斛加工品枫斗（铜皮枫斗、铁皮枫斗、米斛枫斗）中，总含糖量高低为米斛枫斗>铜皮枫斗>>铁皮枫斗，总氨基酸含量为米斛枫斗≈铁皮枫斗>铜皮枫斗。（4）在不同生产阶段（试管苗、栽培苗、石斛加工品枫斗）的米斛中，总含糖量差异明显，结果为栽培米斛>米斛加工品枫斗>>米斛试管苗。在不同生产阶段的铁皮石斛中，脯氨酸含量差异明显，铁皮石斛试管苗>>铁皮石斛加工品枫斗>铁皮石斛栽培苗。4、三种药用石斛甲醇/水相提取物的生物标志物，结果如下：（1）对不同品种石斛试管苗

8、茎中的代谢物进行了研究，找出的生物标志物是鸟氨酸、柠檬酸。（2）对石斛栽培苗茎中的代谢物进行了研究，其中在不同生长年限的铁皮石斛栽培苗茎中找出了六种生物标志物，分别为甘露糖、半乳糖、氨基甲酸、琥珀酸、肌醇、齐墩果腈。在不同品种（铁皮石斛、米斛）的石斛栽培苗中，生物标志物是蔗糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、D-果糖、D-山梨糖。（3）对不同品种石斛加工品枫斗的代谢物进行了研究，找出的生物标志