大丽轮枝菌致病相关突变体的筛选及致病基因vdcyp1功能初步研究

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1、密级论文编vi:中囯农业科学院学位论文大丽轮枝菌致病相关突变体的筛选及致病基因FtfCFP/功能初步研究ScreeningofVerticilliumdahliaePathogenicity-relatedMutantsandFunctionalAnalysisofthePathogenicGeneVdCYPl硕士研究生.•王新艳指导教师：戴小槻研究员申请学位类别：理学硕士专‘业：生物化学与分子生物学研宄方向：棉花真菌病害培养单位：农产品加I：研究所研究生院提期2015年5月独创性声明本人声明所M交的论文是我个人在好师指导下进行的研宂工作及取得的研宂成

2、果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得屮国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被杳阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的企部或部分内容。中国农业科学院硕士学位论文评

3、阅人、答辩委员会签名表论文题目大雨轮枝菌致病相关突变体的筛选及致病基因raCFP/功能初步研究生物化学与棉花真论文作者王新艳专业研究方向分子生物学菌病害指导教师戴小枫研究员培养单位（研宄所）农产品加工研宄所硕（博）姓名职称单位专业签名导师评阁人硕导口郭泽建教授中国农业大学杭物病理学博导0硕导口中国农业科学作物科潘映红研究员蛋白质组学I博导0学研宄所答辩主席硕导口李毅教授北京大学植物病毒学博导0硕导口中国科学院微生物研刘杏忠研宄员真菌分类学博导0宄所硕导口中国农业科学院植物昆虫功能基因王桂荣研宄员博导0保护研宄所组学答硕导口中国农业科学院生物植物分子生物

4、黄荣峰研究员博导0技术研宄所学辩硕导口中国农业科学院蔬菜谢丙炎研宄员植物病理学博导0花卉研宄所委硕导口侯玉霞教授中国农业大学植物病理学博导0员硕导口中国农业科学院农产微生物分子生刘阳研究员博导0品加工研究所物学硕导口博导口会议记录（秘书）张丹丹论文答辩时间地点摘1密级:论文编号:中国农业科学院学位论文大丽轮枝菌致病相关突变体的筛选及致病基因VdCYP1功能初步研究ScreeningofVerticilliumdahliaePathogenicity-relatedMutantsandFunctionalAnalysisofthePathogenicGe

5、neVdCYP1硕士研究生：王新艳指导教师：戴小枫研究员申请学位类别：理学硕士专业：生物化学与分子生物学研究方向：棉花真菌病害培养单位：农产品加工研究所研究生院提交日期2015年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationScreeningofVerticilliumdahliaePathogenicity-relatedMutantsandFunctionalAnalysisofthePathogenicGeneVdCYP1M.S.Candidate：XinyanWangA

6、dvisor：ProfessorXiaofengDaiMajor：BiochemistryandMolecularBiologySpecialty：CottonFungusDiseaseMay2015摘要黄萎病是由大丽轮枝菌（VerticilliumdahliaeKleb.）引起的土传性维管束病害。在我国，黄萎病已经成为棉花生产的主要障碍。棉花黄萎病难以防治，主要原因是其病原菌致病机理复杂，因此，鉴定大丽轮枝菌致病相关基因，阐明其致病机理已成为当前研究热点。农杆菌介导的遗传转化法在功能基因组学中发挥着重要作用，是分离鉴定新基因的有效方法。本实验室前期通

7、过农杆菌介导的遗传转化法获得了高致病力大丽轮枝菌Vd991的T-DNA随机插入突变体15131个。传统温室黄萎病菌致病性鉴定方法已经用于大丽轮枝菌致病相关突变体的筛选，但效率偏低，远不能满足致病相关突变体的筛选与鉴定研究。因此，建立快速、高通量致病性鉴定方法对于大丽轮枝菌致病相关突变体的筛选至关重要。5本研究首先明确了引起棉花黄萎病症状的孢子浓度为大于5.0×10个孢子/mL；建立了大丽轮枝菌的标准化培养方法，简化了孢子悬浮液制备过程；优化了单孢分离、扩大培养、孢子悬浮液制备、接种、继续培养和结果统计等环节，建立了大丽轮枝菌致病性快速鉴定流程，进一步统

8、筹设计构建了大丽轮枝菌致病相关突变体快速筛选体系。运用构建的快速筛选体系对1344个T-DNA