大草蛉5个化感蛋白基因的组织表达谱及配体结合能力分析

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1、？■－分类号Ｓ４３５．０９６５＇学号？爲音農養义聲硕壬学位论文．？．？．．、－．■大草龄５个化感蛋白基因的组织表达谱及配化结合能力分析王思豹－＇．＇．ｒ？；Ｊ、■一■．－Ｖ指导教师董双林教授崔金杰研究员．－Ｉ＇专业名称农业昆虫与害虫防治＇研究方向昆虫生化与分子生物学答辩ｙ期二〇—五年六月■■、．．ｒＴＩＳＳＵＥＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＰＡＴＴＥ

2、ＲＮＳＡＮＤＬＩＧＡＮＤ－ＢＩＮＤＩＮＧＢＩＬＩＵＥＳＯＦＦＩＶＥ乂ＣＨＥＭＯＳＥＮＳＯＲＹＰＲＯＴＥＩＮＳＩＮＣＨＲＹＳＯＰＡＦＡＬＬＥＮＳＲＡＭＢＵＲ（）ＷａｎＳｉｂａｏｇＡＴｈｅｓｉｓＳｕｂｍｉｔ化ｄ！：〇ＮａｎｉｎＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｊｇｇｙＩｎＰａｒｔｉａｌＦｕｌｆｉｌｌｍｅｎｔｏｆ化ｅＲｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓＦｏｒｔｈｅＭａｓ化ｒＤｅｇｒｅｅｏｆ乂ｇｒｉｃｕｋｕｒｅＳｃｉｅｎｃｅ

3、ＳｕｅｒｖｉｓｅｄｂｐｙＰｒｏｆｅｓｓｏｒＤｏｎＳｈｕａｎｌｉｎｇｇＰｒｏ化ｓｓｏｒＣｕｉＪｉｎｉｅｊＤｅａｒｔｍｅｎｔｏｆＥｎｔｏｍｏｌｏｐｇｙＣｏｌｌｅｅｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎｇＮａｎｉｎＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｊｇｇｙＮａｎｉｎＪｉａｎｓｕ２１００９５Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａｊｇ，ｇ，２０１ＪＦｕｎｅ５原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，独立进行研究工作，是本人在导师的指导下所取得的成

4、果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其它个人或集体已…经发表或撰写过的作品成果，均己在文中ｆ。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体Ｗ明确方式标明。。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担学位论文作者（需亲笔）签名：王？浸、年月＾曰学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保，允许论文被查阅和借阅留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版。本人授权南京农业大学可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库

5、进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口＾＂＂（请在上方框内打Ｖ）（学位论文作者（需亲笔）签名：王年月曰导师（需亲笔年月公日目录摘要ＩＡＢＳＴＲＡＣＴＩｌｌ缩略胃ＶＩＩ一第章文献综述１１植物挥发性化学物质与昆虫的关系１１．１植物挥发性信息化合物种类１．２１植物挥发性信息化合物对昆虫的行为影响１２昆虫嗅觉感受机制概述２３昆虫化学感受蛋白

6、研究概述４３．１化学感受蛋白的序列特征及分子结构４３．２昆虫化学感受蛋白表达分布特征５３．３昆虫化学感受蛋白的研究方法和技术６３．４昆虫化学感受蛋白功能研究８４本研究的目的和意义１０第二章大草岭化学感受蛋白的基因鉴定、序列分析及表达谱分析１１１材料与方法１２１．１供试昆虫１２１．２主要试剂和仪器１２１．３ＲＮＡ的提取１２４ＣＤＮＡ一１１．第链的合成３１．５大草岭ＧＳ户基因ｃＤＮＡ序列的ＰＣ民验证１４１．６ＰＣＲ

7、产物的纯化、克隆及测序１５１．７序列分析１６１．８大草岭ＣＳＰ相关基因系统发育分析１６－ＰＣ１１．９ＲＴｑ民反应６２结果分析１７２．１大草岭ＣＳＰ基因的验证、序列分析及进化分析１７２２１．２大草岭ＣＳＰ基因的组织表达谱分析３Ｗ论２４第Ｈ章大草岭化学感受蛋白的原核表达及配体结合能力分析２５１材料巧方法％１．１供试昆虫２６Ｉ大草岭５个化感蛋白基因的组织表达谱及配体结合能力分析１．２主要试剂和仪器如１．３Ｒ

8、ＮＡ的提取２６ＮＡ一链的合成１．４ｃＤ第２６１．５引物设计、ＰＣ民扩增及表达载体的构建％１．６重组表达载体的诱导表达和亲和纯化２８１．７巧光竞争结合实验２８２结果与分析３２２．１ＣｐａｌＣＳＰ的诱导和表达３２２．２ＣａｌＣＳＰ与探针的结合曲线３５ｐ２ｌ．３ＣｐａＣＳＰ与气味物质的结合能力测定３６３纖３８第四章大草蚁成虫对几种信息化合物的触角电位及行为反应测定４１１４１材料与方法１．１供试昆虫４１１．２主要试剂