寡孢节丛孢set-domain相关基因功能的初步研究

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1、分类号■密级二耳编号當七學硝士研究生嗲像铪夂题目寡孢节丛孢相关棊因功能的初步研究学院所、中心）云南省生物资源保护与利用重点实验室一省部共建国家重点实验室培育棊地专业名称微生物学研究生姓名乔燕学号导师姓名张宪勒职称教授助理研究员二〇一五年五月论文独创性声明及使用授权本论文是作者在导师指导下取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研宄成果，不存在剽窃或抄袭行为。与作者一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。现就论文的使用对云南大学授权如下：学校有权保留本论文（含电子版），也可以采用影

2、印、缩印或其他复制手段保存论文；学校有权公布论文的全部或部分内容，可以将论文用于查阅或借阅服务；学校有权向有关机构送交学位论文用于学术规范审查、社会监督或评奖；学校有权将学位论文的全部或部分内容录入有关数据库用于检索服务。内部或保密的论文在解密后应遵循此规定）导师签名曰期研究生签名：介兔云南大学二零一五届硕士学位论文寡孢节丛孢中相关基因的功能初步研究研究生：乔燕导师：张克勤教授李娟助理研宄员专业：胜物方向：真菌分子生物学，云南大学硕士毕业论文摘要寡抱节丛孢是研究捕食线虫真菌和线虫相互作用的模式菌株，该真菌可以产生捕食器官（三维菌网）捕食线虫。本研宄以该菌株为研宄

3、出发点，选取了个含有的甲基化转移酶相关基因、、、进行序列分析和表达分析。同时，通过同源重组技术对其中两个基因进行了敲除，并比较了突变菌株和野生菌株在生长速率、捕食器官形成、产孢能力以及侵染线虫能力方面的差异。本文的研宄结果为深入研究寡孢节丛孢相关基因的功能奠定了基础。此外，已有不少研究报道基因能与一些长非编码相互作用，介导组蛋白的甲基化并对其他功能基因进行调控。因此，本文的研宄结果也为今后深入研宄基因与相互作用的机制奠定了一定基础。主要研宄结果如下：蛋白功能结构域分析显示，寡孢节丛孢中的五个基因主要由、、等保守的功能结构域组成。表达量分析显示，在捕食器官形成过程

4、中，五个基因的表达量都呈现先减后增的规律，即在捕食器官形成的初期表达量下调，随着捕食器官的逐渐形成，表达量逐渐回升，这说明基因可能在捕食器官形成过程中具有一定功能。利用同源重组的方法，成功构建了寡孢节丛孢中五个基因的敲除载体。成功敲除五个基因中的两个（、并对两个突变菌株和原始菌株的表型和生理生化特征进行了比较，包括生长速率、菌落形态、捕食器官形成、产孢能力和孢子形态、侵染线虫能力等。敲除菌株的生长速率比野生型缓慢，产孢能力大大增强，产捕器能力也比野生型的多，但不是很明显。敲除菌株的生长速率也比野生型缓慢，虽然产孢数量与野生型相当，但产捕器数目明显比野生型增多，杀

5、线虫活性也有所增强。云南大学硕士毕业论文分析两株敲除株（、中与产孢相关基因的表达，发现厶中，许多与产孢相关基因的表达量上调，这与我们观察到的产孢数量增加相符合，说明〇与这些产孢基因之间存在调控关系。本论文的主要创新点：利用同源重组的方法，构建了五个基因的敲除载体并成功敲除基因、，并对突变株和野生株的表型和生理生化特征进行了较为系统的比较分析，从而初步推测这些基因可能参与的生物学功能。本研究初步证实了含有的甲基化转移酶基因可能参与捕食线虫真菌捕食器官及产孢的形成，这为今后研究捕食线虫真菌的表观遗传学及的研究奠定了基础。关键词：寡孢节丛孢；基因敲除；；捕食器官云南大

6、学硕士毕业论文，、、—、、—、，云南大学硕士毕业论文、，云南大学硕士毕业论文目录織录第一章食线虫真菌研宄概况及长链非编码研宄进展食线虫真菌的研宄概况长非编码的功能及研宄进展蛋的研究进展本文研宄研宄思路及意义第二章寡孢节丛孢蛋白的序列分析及表达分析前言寡孢节丛孢蛋白的序列分析蛋白序列来源功能结构域分析系统发育分析寡孢节丛孢蛋白的表达分析线虫提取液制备寡孢节丛孢野生菌株的诱导的提取及检测的反转录反应体系親分析基因检索结果基因功能分析结果基因系统发育分析基因表达分析结果提取分析職第三章寡孢节丛孢蛋白基因敲除质粒构建材料与仪器实验材料主要试剂和培养基配方实验用仪器设备实

7、验用酶和试剂盒实验方法基因上下游引物设计及扩增寡孢节丛孢基因组提取质粒的提取质粒的酶切酵母转化化学转化云南大学硕士毕业论文电转化酵母转化子验证大肠杆菌（的转化大肠杆菌转化子验证实验结果寡孢节丛孢中五个基因’端和’端同源片段及扩增酵母转化结果大肠杆菌中全长片段的获得讨论第四章寡抱节丛抱原生质体的制备、转化及转化子的筛选和验证前言实验材料和仪器实验菌株实验所用载体主要溶液及培养基实验卞法敲除载体全长片段扩增及回收寡孢节丛孢原生质体的制备寡孢节丛孢原生质体的转化寡孢节丛孢敲除转化子基因组提取敲除转化子的验证敲除转化子的验证全长片段的扩增原生质体的制备转化子验证转化子验

8、证原生质体制备及转化敲除