小鼠原始生殖细胞在同种正常肝脏中的定向迁移和分化

《小鼠原始生殖细胞在同种正常肝脏中的定向迁移和分化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：R329.2+8密级：不保密UDC：610学校代码：11065硕士学位论文小鼠原始生殖细胞在同种正常肝脏中的定向迁移和分化刘倩指导教师刘晓萍教授学科专业名称人体解剖与组织胚胎学论文答辩日期2015年5月31日摘要目的：移植的干细胞在正常体内是如何迁移和分化的研究报道甚少。本研究动态观察来源于小鼠原始生殖腺嵴的胚胎干细胞在正常肝脏微环境中的迁移、分化、及对正常肝组织的影响。对胚胎干细胞移植的安全性进行评价。方法：无菌分离小鼠原始生殖腺嵴，提取胚胎干细胞，体外扩增后应用BrdU标记干细胞，然

2、后经尾静脉注入正常小鼠体内。于注射后2周、4周、6周、8周取材肝脏，制备连续冰冻切片，应用苏木精-伊红（HE）染色、免疫荧光双重染色和过碘酸雪夫氏（PAS）染色方法检测移植的干细胞在受体肝组织内的分布、干细胞特异性标志物白蛋白表达和糖原合成；显微计数分析肝细胞的增殖状态。实验结果：干细胞移植2周时，可见受体小鼠肝组织内有散在分布的大而圆的BrdU和白蛋白双阳性细胞，PAS染色呈强阳性反应；体积小的BrdU阳性细胞，白蛋白表达呈阴性。HE染色可见肝样细胞体积和细胞核变大、染色质松散、核膜不清晰；单

3、位面积内肝细胞的数量较正常肝组织减少。移植4周时小鼠肝组织单位面积内BrdU阳性细胞的数量较2周时减少，糖原颗粒PAS着色也较2周浅，肝样细胞体积和细胞核仍较大、染色质松散，单位面积内肝细胞的数量较移植2周时增多。移植6周、8周BrdU阳性细胞的数量和染色强度明显下降，肝细胞的体积和胞核的形态趋于正常。移植8周约4/7的小鼠肝组织内BrdU阳性肝样细胞呈阴性；其中1只小鼠肝组织内可见少量BrdU阳性细胞聚集。实验结论：静脉移植胚胎干细胞可以迁移至正常肝脏，分化为肝细胞，并刺激肝细胞增殖；移植8周

4、时肝组织结构恢复正常。硕士研究生刘倩（组织学与胚胎学）指导老师刘晓萍教授关键词:胚胎干细胞，细胞移植，肝脏，小鼠2MigrationandDifferentiationofPrimordialgermcellsinnormallivermicroenviromentAbstractObjectivesToinvestigatethemigrationanddifferentiationofprimordialgermcellsinnormallivermicroenviroment.Materi

5、alsandMethods1.MaterialsMouseprimordialgermcellsisolatedfromfetalurogenitalridgesat11dayDMEM/F12andfetalbovineserum(Gibicol)RibbitantiratAlbuminpolycloneantibody(Abcam)MouseantiBrdUmonocloneantibody(Abcam)5-bromo-2-deoxyuridine(BrdU)（Sigma，America）2.

6、MethodsAfterprimordialgermcells(PGCs)wereculturedandproliferatedinvitro,thesecellswerelabelledwith5-bromo-2-deoxyuridine(BrdU)andtransplantedbytailveininjectionintotheisogeneicnormalmouse.Thelivertissuewasextractedfromthosemicewithtransplantationfor2

7、,4,6and8weeksandnormalcontrolmice.The10μmcryostatlivercontinuoussectionswereprepared.ThemigrationanddifferentiationoftheBrdUpositivetransplantedcellsweredetectedbyimmunohistochemistry,doubleimmunoflorescenceforBrdUandhepatic-specificmarkerALB.Thechan

8、geofhepaticglycogenandmicrostructureofthemicewithtransplantationwereanalyzedbyPASandhematoxylinandeosin(HE)stainingrespectively.ResultsTheratioofBrdUpositivecellslabelledwithBrdUinvitrowasabove90%.TheBrdUpositivetransplantedcellswerefoundinthenormall