山西连翘药材道地性和品质评价研究

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4、量分析；再次，比较不同产地连翘挥发油和水煎液的体外抗菌、抗甲型流感病毒（H1N1）活性。最后，综合运用DNA、GC、HPLC技术及一测多评法，建立山西连翘药材的品质评价体系。方法1.从连翘新鲜果实中提取DNA，采用RAPD-PCR技术，从45条RAPD随机引物中筛选出多态性好的引物，用于不同产地连翘的DNA指纹图谱构建，所得数据用NTSYS-pc2.1软件计算材料间的遗传相似系数，应用UPGMA法进行聚类分析；2.采用水蒸气蒸馏法提取连翘药材的挥发油，应用气相色谱法分析检测比较主要成分（α-蒎烯、莰烯、β-蒎烯、月桂烯、对伞花烃、柠檬烯

5、、α-松油醇）的含量；采用回流提取法提取连翘药材的化学成分，应用高效液相色谱法分析检测比较连翘药材主要成分（松脂醇-β-D-葡萄糖苷、连翘酯苷A、连翘酯苷B、芦丁、连翘苷、连翘酯素）的含量。3.采用火焰原子吸收光谱法，浓HNO3-HClO4(4:1)为消解剂，进行不同产地连翘微量元素K、Mg、Ca、Na、Mn、Fe、Cu、Zn的含量测定。4.采用K-B纸片扩散法，以抑菌圈直径为评价指标，研究不同产地连翘挥发油及水煎液的体外抗菌（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌、枯草杆菌、白色念珠菌）的活性；采用药物对MDCK细胞毒性和抗甲型流感病毒

6、活性实验，以SI为评价指标，研究不同产地连翘药材的体外抗甲型流感病毒（H1N1）的活性；5.采用气相色谱法，以柠檬烯为内参物，建立其它待评价成分（α-蒎烯、莰烯、β-蒎烯、月桂烯、α-松油醇）的相对校正因子，用于比较一测多评法计算值与外标法实测值的差异，以相对误差验证一测多评法用于不同产地连翘挥发油中6种成分含量测定的可靠性；采用液相色谱法，以连翘苷为内参物，建立其它待评价成分（松脂醇-β-D-葡萄糖苷、连翘酯苷A、连翘酯苷B、芦丁、连翘酯素）的相对校正因子，用于比较一测多评法计算值与外标法实测值的差异，以相对误差验证一测多评法用于6种

7、成分含量测定的可靠性。结果1.连翘药材遗传信息研究共筛选出11条多态性好的引物，PCR扩增共获得80条谱带，平均每个引物扩增出7.27条谱带，多态性谱带67条（比率为83.8%），I可作为连翘药材资源研究的一种有效分子标记；聚类分析结果显示，从遗传相似系数0.672处划分，14批连翘药材可分成两大类：山西独聚一类，河北、河南、陕西聚为另一类。2.采用GC法测定不同产地连翘挥发油中主要成分的含量存在明显差异，山西连翘挥发油主成分含量整体上高于河南、河北、陕西产地；采用HPLC法测定不同产地连翘主要成分的含量也存在一定差异，山西产地连翘药材

8、主要成分（松脂醇-β-D-葡萄糖苷、连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、连翘酯素）含量整体高于河南、河北、陕西。3.采用AAS法测定连翘各微量元素，该方法准确度与重复性良好，不同产地连翘药材各微量元素存在差异。