橡胶树白粉菌致病相关基因及mapk途径相关基因的克隆和定量分析

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1、学校代码：学号：分类号：密级硕士学位论文题目：橡胶树白粉菌致病相关基因及途径相关基因的克隆和定量分析作者：孙雅琦指导教师：郑服丛教授缀卫国教授专业：分子植物病理学时间：二一五年五月CloningandQuantitativeRT-PCRAnalysisofPathogenicitygenesandMAPKpathwaygenesofOidiumheveaeAThesisSubmitedinPartialFulfillmentoftheRequirementFortheMasterDegreeinMolecularPlantPathologyBySunYaqiSu

2、pervisor:Zhengfucong,MiaoWei-guoMajor:MolecularplantpathologySubmittedtime:May,2015海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名曰期■月学位论文版权使用授权说明本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论

3、文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。学校可以为存在馆际合作关系兄弟高校用户提供文献传递服务和交换服务。本人授权海南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以釆用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密论文在解密后遵守此规定。论文作者签名导师签名曰期日期年：月本人已经认真阅读“高校学位论文全文数据库发布章程”，同意将本人的学位论文提交“高校学位论文全文数据库”中全文发布并可按“章程”中规定享受相关权益。同意论文提交后滞后：口半年：口一年：《二年发布。论文作者签名：导师签名

4、曰期曰期年：月产摘要橡胶树白粉菌是橡胶树白粉病的病原菌，具有专性寄生的特性，对天然橡胶的产量有极大的影响。橡胶白粉菌的相关研究主要集中在病原菌和寄主细胞学观察、病害预测防治方面，而关于分子方面的研究，致病性相关基因及其功能鲜有报道。为验证橡胶树白粉菌致病过程中基因的表达差异和调控机制，本实验在橡胶树白粉菌菌株基因组和与橡胶品系互作转录组的基础上，筛选到致病和信号途径相关基因，监测其在橡胶树白粉菌致病过程中的表达差异，为进一步验证其具体功能提供理论基础。主要研究结果如下：、用菌株接种寄主培养新鲜孢子接种在抽芽叶龄橡胶叶片上，分别培养至、、提取。在橡胶白粉菌基因组测

5、序（未发表）基础上，通过注释，选取其中个和致病性相关的基因（，进行克隆、扩增，分析其在致病过程中的表达差异，并与转录组相对应。结果表明：在，初次侵染器官附着胞、吸器等发育完成，、为上调基因，其可能与侵染初期侵染器官的生长相关；菌丝体生长时期，代谢基因、、生长基因和；假定蛋白为上调基因，这些基因可能与菌丝生长密切相关；产生新生分生孢子阶段，代谢基因，生长基因假定蛋白为上调基因，这砦基因可能与分生孢子产生有关。、利用橡胶白粉菌基因组数据库和小麦白粉菌的同源序列进行比对，获得个信号途径相关基因。并运用蛋白质结构域及聚类分析，构建橡胶树白粉菌中的级联途径简图，共发现了个

6、基因、个基因和个基因，为继续探究植物病原真菌信号途径基因的功能奠定了基础。橡胶白粉菌在表面培养的侵染发育可大致归纳为未萌发（、萌发（、附着胞形成（、和次生附着胞（、等个形态发育阶段；在此基础上检测信号途径相关的基因在表面的表达差异情况。在芽管生成时，全部基因为上调，上调倍数较大的基因有、、和证明途径的在芽管生成时发挥主要作用；附着胞形成时，全部基因也都为上调基因，上调倍数明显增大的为基因、、、、、，证明信号途径中的、、和在附着胞形成过程中起主要作用；吸器形成时，为下调基因，剩余为上调基因，明显上调的基因为、、、20892,证明在吸器形成时，途径中的起主要作用；菌

7、丝生成时，全部基因为上调，明显上调的基因为、、、、和，证明在此阶段起主要作用的为途径中的。用信号途径特异性外源抑制剂一处理，促使白粉菌在非诱导琼脂表面萌发并形成附着胞。在琼脂培养介质中加入浓度为—浓度梯度的。结果表明，随抑制剂的浓度增加，孢子萌发率明显下降，且与未加入抑制剂的对照有显著差异（。时，最终萌发率为，最终萌发率为，最终萌发率为均低于对照，其最终萌发率。说明途径相关基因参与了的萌发过程。关键词：橡胶树白粉菌；基因组；致病性；侵染发育；信号传导途径AbstractPowderymildewinrubbertree,causedbyobligateparas

8、iticfungusOi