牛β-乳球蛋白在人肠道肿瘤细胞中相互作用蛋白的研究

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1、领古学化絶义牛－乳球蛋白在人肠道肿瘤细胞中Ｐ相互作用蛋白的研究；？．Ｖ．．邵勇＊．．．＇．二？－．＇、Ｖ■－＇．．－．．’：．＇．＇■■？？．：＇．，＼＇＇：．＾．…：Ｖ．．？．，’■＇■．巧爲、乂榮二〇—五年走月分类号ＴＳ２５２．９密级ＵＤＣ硕±学位论文牛－乳球蛋白在人肠道肿瘤细胞中相Ｐ互作用蛋白的研究邵勇学科专业粮食、油脂及植物蛋白工程指导教师江化锐论文答辩日期２０１５－０５－２２

2、学位授予日期Ｗｆ－答辩委员会主席刘小玲教授广西大学学位论文原创性和使用授权声明本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除已特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料一。与我同工作的同事对本论文的研究工作所做的贡献均己在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产。权归属广西大学本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，即；学校有权保存并向国家有关部口或机构送交学位

3、论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可Ｗ将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可Ｗ采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于：□保密，在年解密后适用授权。因＾保密。请在＂＂Ｗ上相应方框内打Ｖ（）论文作者签名：日期：指导教师签名：日期作者联系电话：电子邮箱；牛－乳巧蚕白在人肠道阱瘤细胞中相互作用蛋白的研究ｐ摘要－－－Ｐ乳球蛋白（ｐｌａｃｔｏｌｏｂｕｌｉｎＬ，属于ｇ，ｐ巧是乳清蛋白的主要成分－Ｌｉｏｃａｌｉｎ家族，能和视黄醇、胡萝ｈ素、维生素Ｄ等脂溶性小分子ｐＰ化

4、合物结合，起到载体作用，因此，具有应用于口服结肠定位给药系－统的潜力。由于ＰＬＧ具有保护脂溶性小分子不受胃肠道环境影响的作－－ＬＧ进入肠道细胞的方式具有重要意义ＬＧ用，研究Ｐ。目前关于Ｐ受体的报道还比较少，只有关于人恶性多发牲崎胎瘤细胞、红细胞、生殖细胞－、哺乳动物杂交瘤细胞中受体的研究，有关Ｐ乳球蛋白在肠道细胞中受体的研究还未见报道。本课题通过免疫共沉淀一－ｃｏｍｍｕｎｏｒｅｃｉｉｔａｔｏｎ￣ＩＰ（ｉｐｐｉＣｏ技术结合维聚丙帰醜胺凝胶电泳Ｗ，）－及纳升级液相色谱串联质谱（ｎａｎｏＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）技术研究牛Ｐ－ＬＧ在疯道肿瘤细胞中的

5、识别受体。选择体外肠道肿瘤研究较为常用的细胞株Ｃａｃｏ－２细胞和ＬｏＶｏ细胞进行体外培养－２细，作为本课题的受试细胞。发现Ｃａｃｏ胞形态伸展连接成片，传代后７２ｈ时细胞汇合度达到９０％Ｗ上。ＬｏＶｏ细胞形态规则６，４８ｈ时汇合度达到９０％。将受试细胞Ｗ１〇个／ｍＬ的浓度接种于玻底培养皿。使用巧光探针分别标记细胞膜、细胞核；激光共聚焦显－ＬＧｎ微镜观察萊光标记的Ｐ与细胞作用０ｍｉｎ、１５ｍｉｎ、３０ｍｉｎ、６０ｍｉ－－时－乳球蛋白与细胞的相互作用情况ＬＧ分别与Ｃａｃｏ２Ｐ。结果发现在Ｐ？３０ｍｎ内－ＬＧ随时间的延长逐渐在

6、细胞和ＬｏＶｏ细胞相互解育的０ｉ，Ｐ？６０ｍ－细胞膜外侧聚集，但在３０ｉｎ内ＰＬＧ在细胞膜外侧的聚集量没有明显变化。Ｉ一－－－ＬＧ与豚道肿瘤细胞的相互作用ＬＧＣａｃｏ２进步研究Ｐ，将Ｐ与－细胞和ＬｏＶｏ细胞分别进行化赔育后ＣｏＩＰ分离－ＬＧ，使用Ｐ及其在肠道肿瘤细胞上的相互作用蛋白ｏ－ＩＰ分离下来的样品进行十二焼。将Ｃ－－基横酸钢聚丙婦醜胺凝胶ｏｄｉｕｍｄｏｄｅｃｌｓｕｌｆｏｎａｔｅｏｌａｃｒｌａｍｉｄｅ（ｓｙｐｙｙ－ｅｌｅｌｅｃｔｒｏｈｏｒｅｓｉｓ，ＳＤＳＰＡＧＥ）电泳、考马斯亮藍染色、免疫印迹法ｇｐ－ＩＰ－ＰＡＧＥ电泳分离

7、后检测。结果发现Ｃｏ分离出的样品经过ＳＤＳ、考２０？７０马斯亮蓝染色观察发现，在ｋＤａ之间存在蛋白条带，但无法观－－ＬＧ的蛋白条带察到经免疫印迹法检测，发现ＣｏＩＰ分离出的样品Ｐ；－－ＬＧ－存在Ｐ，说明ＣｏＩＰ成功分离ＰＬＧ及其肠道肿瘤细胞相互作用蛋白。ｎａｎｏＬＣ－ＭＳ－利用硝酸银染色法和／ＭＳ技术鉴定ＰＬＧ在肠道肿瘤细－２细胞和ＬｏＶｏ细胞的相互作用蛋白胞Ｃａｃｏ。结果发现两株肠道肿瘤细胞中存在与－ＬＧ稍互作用的蛋白可能是组蛋白Ｈ４、核糖体蛋白Ｓ１８、ＰＳ２５，共３种蛋白，但未发现细胞受体。－关键词：Ｐ乳球蛋白免