缺氧肠上皮细胞自噬的变化及意义

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1、'vk.、中图分类号：R64:R644iR364.4f”)医，乂摩SICHUANMEDICALUNIVERSITY硕士学位论文.、••..:rU缺氣肠上皮细胞自噬的变化及意义院（系)、所临床医学蓝研究生姓名____遂m学科、告#外科.二•免；、v导师姓名闫柏刚»«四川医科大学毕业硕士研究生学位论文独创性声明及发表承诺书本人声明所呈交的学位论文（已整理成发表形式）是我个人在S导师指导下，由导师及四川医科大学提供一切科研条件的情况下进行？工#及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其生其它机构已

2、经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所兮载均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。在即将毕业离校之际，本人艺重承诺：该论文将以四川医科大学的名义发表（论文作者为研究生及导师，作者$在单位为四川医科大学），并在发表后立即将发表论文原件（期刊）寄与导焊1亍:学位论文作者签名漆%导师签名：日期:約疒牵IT!%日日期K年；一月^四川医科大学硕士学位论文版权使用授权书本人完全了解四川医科大学有关保留、使用学位论文的规定，g卩：四川医科大学有权保留并向有关部门或机构送交本人学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅

3、和借阅，允许有关部门或机构以电子出版物形式出版发行，并对外进行全文内容服务。本人授权四川医科大学可以将本人学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，进行数字化处理汇编、通过网络或其它途径进行交流传播，可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印、扫描或其他复制手段保存和汇编学位论文，即四川医科大学具有本人学位论文的数字化制品复制权、信息网络传播权和汇编权。同时授权中国科学技术信息研究尹碑本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》等数据库，并通过网络向社会公众提供信息服务。保密□，在.年解密后适圬本授权

4、本人提交的学位论文属不保密(请在以上方框内?学位论文作者签名导师签名:曰期:>“-年r月油导师签章:地址及邮政编码：曰期产r年厂月Yb联系电话：联系电话:..电子信箱:目录1缺氧肠上皮细胞自噬的变化及意义…………………………11.1中文摘要………………………………………………………11.2英文摘要………………………………………………………31.3前言……………………………………………………………61.4材料与方法……………………………………………………101.5结果……………………………………………………………21

5、1.6讨论……………………………………………………………271.7结论……………………………………………………………321.8参考文献………………………………………………………331.9英汉缩略词对照表……………………………………………402致谢……………………………………………………………423自噬与心肌缺血再灌注损害（综述）………………………43四川医科大学硕士学位论文缺氧肠上皮细胞自噬的变化及意义摘要目的：自噬是指由细胞粗面内质网或高尔基体等细胞器脱落的双层膜包裹部分细胞质和受损的细胞器及蛋白质，而后与溶酶体

6、融合形成自噬溶酶体，降解其所包裹的内容物的过程，从而满足细胞本身的代谢需要及细胞器的不断更新。自噬在细胞生长发育过程中起着极其重要的作用，在机体缺血缺氧性损害中也扮演着至关重要的角色。严重创伤及烧伤后易导致低血容量性休克，引起机体有效血容量减少导致全身组织缺血缺氧，机体为保证心脑血管等重要脏器血流供应，发生血液重分布，即指皮肤、骨骼肌及腹腔内脏的血管收缩，而心、脑血管不收缩，从而保证心脑重要脏器血液供应。在血液重分布情况下肠道是最常受累的器官，因肠道组织灌流不足、氧需求增加及高代谢所造成的缺氧，导致肠黏膜结构与功能

7、受损。目前缺血缺氧所致胃肠道上皮细胞的自噬情况尚不清楚，本研究利用体外缺氧模型模拟胃肠道缺血缺氧，动态观察人肠上皮细胞Caco-2在缺氧条件下的自噬变化情况，旨在了解缺氧对肠上皮细胞自噬的影响，为研究自噬在缺氧后肠上皮细胞损害中作用奠定一定的基础。方法：1.以正常培养的人肠上皮细胞株Caco-2为研究对象，分别于常氧处理组（正常对照组）及缺氧组（0.5h、1h、2h、6h、12h及24h）提取细胞总蛋白并测其蛋白浓度。2．采用蛋白免疫印法迹检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3及P62表达的变化，以反映缺氧后各时相

8、点自噬相关分子水平的动态变化。3.于细胞缺氧前及缺氧后6h用透射电子显微镜下观察细胞自噬溶酶1四川医科大学硕士学位论文体的变化情况。4.GFP-LC3B融合蛋白示踪肠上皮细胞，于缺氧前及缺氧后6h用激光共聚焦显微镜下观察细胞内自噬体形成的情况。结果：1.与常氧处理组比较，缺氧0.5h后肠上皮细胞Beclin1和LC3的蛋白表达水平即开始增加，随后呈现逐渐上升