西北地区常见植物植原体病害分子鉴定及株系多样性研究

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1、分类号：S763.14学校代码：10712UDC：579研究生学号：2010060050密级：公开2015届攻读博士学位研究生学位（毕业）论文西北地区常见植物植原体病害分子鉴定及株系多样性研究学科专业：植物病理学研究方向：植物病毒学研究生李正男指导教师：吴云锋教授完成时间：2015年5月中国陕西杨凌Classificationcode:S763.14Universitycode:10712UDC:579Postgraduatenumber:2010060050Confidentialitylevel:PublicDissertationforDoctorDegreeNorthwes

2、tA＆FUniversityin2015MOLECULARDIAGNOSISOFPHYTOPLASMADISEASESONCOMMONPLANTSINNORTHWESTCHINAANDDIVERSITYSTUDYOFTHEASSOCIATEDPHYTOPLASMASMajor:PlantPathologyResearchField:PlantVirologyNameofPostgraduate:LiZheng-NanAdvisorProfessor:WuYun-FengDateofSubmission:May2015YanglingShaanxiChina西北地区常见植物植原体病害

3、分子鉴定及株系多样性研究摘要植原体（Phytoplasma）是一类没有细胞壁的原核生物，严格寄生于植物韧皮部筛管细胞内，能够引起多种植物病害并造成严重经济损失。自然条件下，植原体类病害主要由刺吸式口器昆虫传播。本研究采用分子生物学方法对西北地区常见植物植原体相关病害的种类进行了鉴定，并克隆了这些植原体株系的16SrRNA基因及部分株系的rp基因，从组和亚组水平明确了它们的分类地位。另外，对10种PCR鉴定为植原体感染的植物材料进行了透射电镜观察，从形态学上确定了植原体的侵染，并对寄主植物进行了细胞病理学观察。采用昆虫传毒和菟丝子传毒的方式在温室内长春花上保存四种植原体毒源。1、根据

4、植原体病害的症状特点，从陕西省、甘肃省、宁夏回族自治区、青海省、新疆维吾尔族自治区、内蒙古鄂尔多斯市采集了218份疑似植原体侵染的植物样品。采用植原体16SrRNA基因通用引物P1/P7和R16F2n/R2对这些样品进行了植原体感染情况鉴定，共检测出泡桐丛枝、枣疯、酸枣丛枝、凌霄花丛枝、甜樱桃丛枝、仙人掌丛枝、国槐丛枝、刺槐丛枝、南瓜丛枝、苦楝丛枝、油菜绿变、狗尾草绿变、樱花黄化、桃树黄化、苦楝黄化、中华小苦荬扁茎、狗尾草红叶、马铃薯紫顶、狗牙根白叶、苜蓿丛枝、早园竹丛枝、菲白竹丛枝、五角枫丛枝、辣椒丛枝、凤仙花绿变、月季绿变、菊花绿变、樱花绿变、马塘黄化、葡萄黄化、樱桃李黄化、谷

5、子黄化、苹果衰退、普纳菊苣扁茎、桔梗扁茎、国槐扁茎、紫薇扁茎、芝麻扁茎、谷子红叶等39种植原体病害，218份植物病害样品中201份PCR鉴定为阳性。明确了泡桐丛枝、枣疯和酸枣丛枝是西北地区分布最广泛的一类植原体病害；凌霄花丛枝、菲白竹丛枝、早园竹丛枝、中华小苦荬扁茎、普纳菊苣扁茎、桔梗扁茎、谷子黄化（红叶）、苹果衰退等9种病害为世界上首次报道的植原体病害；南瓜丛枝、狗尾草绿变（红叶）、油菜绿变、五角枫丛枝、凤仙花绿变、菊花绿变、马唐黄化、葡萄黄化等8类为中国首次发现的植原体病害。2、植原体16SrRNA基因的系统发育分析结果和RFLP分析结果表明：苹果衰退（AD）属于16SrV-B

6、亚组、AWB属于16SrV-B亚组、油菜绿变（BrV）属于16SrVI-A亚组、仙人掌丛枝属于16SrII-A亚组、苦楝丛枝（CbWB）属于16SrI-B亚组、狗牙根白叶（CdWL）属于16SrXIV-A亚组、中华小苦荬扁茎（CiFS）属于16SrI-C亚组、樱桃李黄化（CpY）属于16SrI组一个新的亚组、凌霄花丛枝（CtcWB）属于16SrI-C亚组、菊花绿变（CV）属于16SrI-B亚组、苦楝黄化（CY）属于16SrI-B亚组、马唐黄化（DY）属于属于16SrV-B亚组、狗尾草红叶（GbR）属于16SrI-B亚组、狗尾草绿变（GbV）属于16SrI-B亚组、五角枫丛枝（JmW

7、B）属于16SrI-D亚组、枣疯病（JWB）属于16SrV-B亚组、紫薇扁茎（LiFS）属于16SrI组新亚组、谷子红叶（MR）属于16SrI-B亚组、谷子黄化（MY）属于16SrI-C亚组、泡桐丛枝（PauWB）属于16SrI-D亚组、普纳菊苣扁茎（PcWB）属于16SrV-B亚组、辣椒丛枝（PepWB）属于16SrI-B亚组、桔梗扁茎（PgFS）属于16SrI组新亚组、马铃薯紫顶（PpT）属于16SrVI-A亚组、早园竹丛枝（PpWB）属于16SrI组新亚组、桃黄