核因子-κb介导糖尿病性痛觉过敏的分子和表观调控机制研究

《核因子-κb介导糖尿病性痛觉过敏的分子和表观调控机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、SOOCHOWUNIVERSITY博士学位论文论文题目研究生姓名指导教师姓名专业名称研究方向@孑丰@@#白匀‘石出Ife论文提交日期2015妇月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研宄成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研宂作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：m“日期：^^苏州大学学位论文使用授权声明本人

2、完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在年―—月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名：Miin日期：威核因子-κB介导糖尿病

3、性痛觉过敏的分子和表观调控机制研究中文摘要中文摘要研究背景糖尿病神经病变是糖尿病最常见也是最易致残的慢性并发症之一，其发生率根据诊断标准和检测方法的不同，患病率在10%~96%不等（中国2型糖尿病防治指南2013版）。其最常见的类型是周围神经病变，其次为糖尿病自主神经病变。周围神经病变常表现为远端肢体对称性的麻木感，部分患者会出现异常疼痛，包括自发痛、痛觉过敏（轻度刺激引起剧烈疼痛）和痛觉超敏（无害刺激如光照、触摸时也能引起明显疼痛）等，称为糖尿病神经病理性疼痛。而自主神经病变主要影响心血管、胃肠及泌尿生殖系统功能。当累及上消化道时，常

4、导致患者出现上腹痛或不适、恶心呕吐、反酸烧心、餐后饱胀等一系列症状，同时具有胃部痛觉过敏现象，表现为胃对胃酸、炎症或扩张等刺激的反应性明显增加。目前糖尿病神经病变的发病机理尚未完全阐明，亦缺乏有效的临床治疗手段，显著影响着糖尿病患者的生活质量。进一步研究其机制，对于寻找有效的治疗靶点非常重要。第一部分1.研究目的阐明核因子-κB在糖尿病胃部痛觉过敏形成中的作用及相关机制，主要研究内容包括：(1)探讨糖尿病大鼠是否存在胃部痛觉过敏及其相关电生理机制。(2)探讨CBS-H2S系统是否参与糖尿病大鼠胃部痛觉过敏的形成。(3)探讨NF-κB对C

5、BS-H2S系统的调控作用及相关机制。2.实验方法(1)选用雌性成年SD大鼠作为实验动物，应用STZ（65mg/kg）腹腔单次注射诱导糖尿病模型。应用胃部球囊扩张及肌电图分析技术，检测大鼠的胃部感觉。(2)应用全细胞膜片钳技术记录大鼠胃特异性DRG神经元的兴奋性及硫化氢对胃特异性DRG神经元兴奋性的影响。(3)应用Real-timePCR和Westernblotting方法检测大鼠胃特异性DRG中NF-κB、硫化氢合成酶CBS、DNA甲基化相关酶的表达水平。I中文摘要核因子-κB介导糖尿病性痛觉过敏的分子和表观调控机制研究(4)应用甲基

6、化特异性PCR(MSP)和亚硫酸氢盐处理测序法（BSP）检测大鼠胃特异性DRG神经元中cbs基因启动子区的甲基化状态。(5)应用免疫荧光染色法观察NF-κB与CBS在胃特异性DRG神经元上的表达情况。(6)应用染色质免疫共沉淀（CHIP）法检测大鼠胃特异性DRG中NF-κB与cbs基因启动子区的结合度。3.实验结果(1)STZ腹腔注射后2-6周糖尿病大鼠出现明显的胃部痛觉过敏，第4-6周痛敏最为明显。STZ注射后第4周，糖尿病大鼠胃特异性DRG神经元兴奋性明显增加。(2)糖尿病大鼠胃特异性DRG中CBS表达增加。腹腔注射CBS抑制剂AO

7、AA能够缓解糖尿病大鼠胃部痛觉过敏，并呈剂量依赖性。腹腔注射AOAA能够降低糖尿病大鼠胃特异性DRG神经元的兴奋性。H2S衍生剂NaHS能够增加DRG神经元兴奋性。(3)NF-κB与CBS共表达于大鼠胃特异性DRG神经元中，糖尿病大鼠胃特异性DRG中NF-κB与cbs基因启动子区结合度增加。腹腔注射NF-κB抑制剂PDTC能够下调糖尿病大鼠胃特异性DRG中CBS的表达。糖尿病大鼠胃特异性DRG中cbs基因启动子区明显去甲基化，DNA甲基转移酶3a、3b表达下调。4.小结(1)糖尿病大鼠存在胃部痛觉过敏，并与胃特异性DRG神经元兴奋性增加

8、有关；(2)糖尿病状态下，胃特异性DRG神经元中CBS的表达上调，增加H2S的合成，致敏神经元，参与糖尿病胃部痛觉过敏的形成；(3)糖尿病状态下，活化的NF-κB可以在转录水平上调CBS的表达；cbs基因启