桦褐孔菌多糖的分离纯化及抗氧化活性研究

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1、分类号Q936单位代码10447密级无研究生学号1210150302硕士学位论文论文题目:桦褐孔菌多糖的分离纯化及抗氧化活性研究研究生姓名朱晓丽专业名称微生物学指导教师姓名杜秀菊副教授学院生命科学学院论文提交日期2015年04月原创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，论文中不含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得聊城大学或其他教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确

2、方式标明。本人承担本声明的法律责任。学位论文作者签名：日期学位论文使用授权声明本学位论文作者完全了解聊城大学有关保留、使用学位论文的规定，即：聊城大学有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权聊城大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它手段保存、汇编学位论文。学位论文作者签名：日期导师签名：日期摘要桦褐孔菌(Inonotusobliquus(Fr.)Pilat)属于真菌门、担子菌亚门、层菌纲、非褐菌目、多孔菌科

3、、褐卧孔菌属，在俄罗斯通常被称为chaga。是一种药用真菌，滋生在北半球北纬40°～50°的地区，是一种微带苦涩的多孢子坚硬的菌类植物，通常生长在光线昏暗且湿度较高的山林中，主要生长于腐树或其树木根部。桦褐孔菌被人们所知并且得到各国学者的广泛关注。经研究发现桦褐孔菌含有大量的多糖体，这些多糖体可以抑制肿瘤癌细胞的扩散，提高细胞的免疫力，从而起到抗癌、抗氧化以及增强免疫力的作用，当今抗肿瘤药物的研究发展，多糖已经成为一个主要的发展方向。在提取方法和活性等方面，各国学者们已经进行了大量探索性的研究工作

4、，但是多集中于粗多糖层面，多糖的提取也多集中于水浸提，辅助方法中多用微波辅助。通过大量查阅相关文献，并结合本实验室的实际试验情况，本文的主要研究内容为：1、采用系统溶剂法，即分别以水、草酸铵(3%)、NaOH(5%)为提取溶剂，对桦褐孔菌多糖进行提取，并且采用光波辅助，最优提取工艺条件为：料液比为1:30、温度95℃、提取时间2.5h，光波功率1200W。并且证实光波辅助对于桦褐孔菌粗多糖的提取得率有一定的提高作用。2、以多糖提取率和多糖含量为判断指标，利用料液比、提取时间和提取温度三种影响因素设

5、计正交试验，以得到一组最优提取条件来优化传统的水浸提方法：料液比1:30、提取温度95℃、提取时间2.5h。3、通过乙醇分级获得三种不同的多糖组分：IOP40、IOP60、IOP80，含量分别为：19.4%、41.12%、9.23%。4、使用Sevage法和大孔树脂法去蛋白及色素来进一步纯化桦褐孔菌多糖，并通过正交试验对Sevage法进行了优化，优化条件为：Sevage试剂添加量为多糖提取液体积的2倍，氯仿正丁醇体积比为4:1，振摇时间就为25min，脱蛋白次数3次。5、提取了三种水溶性多糖成分(

6、IOP40，IOP60和IOP80)，分析了它们的理化特性，包括总糖含量、蛋白质含量、单糖成分和百分含量。6、依据2,2-联苯-1-苦味基(DPPH)、羟基自由基、过氧化物阴离子和过氧化氢的还原力测试和清除能力，研究了IOP40、IOP60和IOP80的体外抗氧化性能。一般来说，随着测试范围内浓度的升高，三种多糖成分的抗氧化能力逐渐增大。还原力、DPPH清除能力、H2O2清除能力和羟自由基清除能力的次序都是IOP60>IOP40>IOP80。这些发现说明从桦褐孔菌中提取的三种多糖成分，特别是IOP

7、60可用做功能食品和医药工业中的天然成分以缓解氧化压力。关键词：桦褐孔菌多糖；分离和纯化；抗氧化活性ABSTRACTInonotusobliquus(IO(Fr.)Pilat)belongstotheeumycota,basidiomycotina,hymenomycetes,brownfungiorder,polyporaceae,andPoriahypobrunneaPetch,andinRussiaitisusuallycalledchaga.Asamedicalfungi,itgrowsi

8、nareaataboutnorthernlatitudeintheNorthernHemisphere.Itisakindofslightlybitterandastringentfungiwithhardpolysporaandusuallylivinginforestswithdarklightandratherhighhumidity.Itmainlygrowsatrottingtreesortherootsofthem.Inonotusobliquushasbeenwell