氢气对脓毒症小鼠脑损伤的保护作用及其相关机制

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1、分类号：R614学校代码：10062密级：学号：2012602773硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：氢气对脓毒症小鼠脑损伤的保护作用及其相关机制TITLETheprotectiveeffectsandmechanismsofhydrogengasonbraininjuryinsepticmice一级学科：临床医学二级学科：麻醉学论文作者：刘玲玲指导教师：于泳浩教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R614学校代码：10062密级：学号：2012602773学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学硕士学

2、位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：氢气对脓毒症小鼠脑损伤的保护作用及其相关机制TITLETheprotectiveeffectsandmechanismsofhydrogengasonbraininjuryinsepticmice一级学科：临床医学二级学科：麻醉学论文作者：刘玲玲指导教师：于泳浩教授导师组成员：谢克亮老师天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集

3、体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日天津医科大学硕士

4、学位论文中文摘要背景：脓毒症是指由感染或高度可疑感染因素引起的全身炎症反应综合征（systemicinflammatoryresponsesyndrome,SRIS），是创伤、手术后的常见并发症，以及重症监护病房内非心脏病患者死亡的主要原因[1,2]。研究发现，脓毒症患者出现中枢神经系统并发症早于其他系统，且脓毒症患者伴脑功能障碍时死亡率相对明显提高[3]。此外，9～71%脓毒症存活者伴有不同程度的认知功能障碍。因此，改善脓毒症脑功能障碍对脓毒症的治疗和预后均具有重要意义。氢气作为一种新型的气体信号分子，具有明显抗炎、抗氧化、抗凋亡及信号调节

5、[4]作用。前期研究发现，2%氢气吸入可明显提高脓毒症小鼠的存活率，并减轻心、肺和肾等重要器官损伤[5,6]。本文拟在前期研究的基础上，采用盲肠结扎穿孔法诱导脓毒症小鼠脑损伤，探讨2%氢气吸入对脓毒症小鼠脑损伤的保护作用及其相关机制，为其临床应用提供理论依据。目的：观察2%氢气吸入对脓毒症小鼠的的存活率和认知功能的影响，并探讨其对脓毒症诱导的脑损伤的保护作用和相关机制。方法：成年雄性ICR小鼠，重20～25g，随机数字表法分为假手术组（Sham组）、假手术+氢气组（Sham+H2组）、脓毒症组（CLP组）和脓毒症+氢气组（CLP+H2组）。采

6、用盲肠结扎穿孔法（CLP）诱导脓毒症小鼠脑损伤。氢气治疗组小鼠在建模后1h和6h时分别吸入2%氢气1h。于假手术或CLP后7d内观察各组小鼠的存活情况。于假手术或CLP后3～14d通过Y-迷宫、条件恐惧实验及Morris水迷宫检测各组小鼠的短期工作记忆、长期恐惧记忆能力及学习和空间识别记忆能力。在建模后1h和6h时给予氢气吸入，通过氢微电极分别检测各组小鼠氢气吸入后和停止氢气吸入后不同时间点动脉血、静脉血及脑组织氢气浓度。于假手术或CLP后24h时，通过尼氏染色和TUNEL染色观察脑组织病理改变和神经元凋亡情况；通过伊文氏蓝法和脑组织含水量的

7、测定观察脑组织血脑屏障的通透性；通过Elisa或比色法检测血浆和海马组织中TNF-α、IL-1β、HMGB1、IL-10的浓度，SOD和CAT的活性及MDA和8-iso-PGF2α的水平；通过WesternBlot检测总Nrf2、核Nrf2及HO-1的蛋白表达情况；通过免疫荧光染色观察各组小鼠海马组织中Nrf2的表达及核转位情况；通过免疫组化染色观察各组小鼠海马组织中HO-1的定位和表达。结果：2%氢气明显提高脓毒症小鼠7d内的存活率（P<0.05）。在适应和训练I天津医科大学硕士学位论文阶段，各组小鼠的僵直时间百分比无明显差异（P﹥0.05

8、）；于假手术或CLP后3～14d，氢气明显提高脓毒症小鼠的交替百分比（P<0.01）；氢气显著提高脓毒症小鼠的僵直时间百分比（P<0.01）；在隐蔽站台试验中，氢气