猪圆环病毒2型灭活苗参考品的研制及定值方法研究

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1、密级：无论文编号：82110-2012-06中国兽医药品监察所硕士学位论文猪圆环病毒2型灭活苗参考品的研制及定值方法研究TheResearchAndEvaluationofReferenceStandardofPorcineCircovirusType2InactivatedVaccine(课题来源十二五”科技基础性工作专项重点项目编号：2013FY113300-3)研究生：王晓卉指导教师：王在时研究员申请学位类别:农学硕士学科专业：预防兽医学研究方向：兽医微生物与免疫学位授予单位:中国兽医药品监察所2015年5月独创性声明木人郑重声明：所呈交的学位论文，

2、是本人在导师指导K，进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的闪容外，本学位论文的研究成果不包含任何他人创作的、己公开发表或者没有公开发表的作品的内容，也不包含为获得中国兽丨欠:药品监察所或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本论文所涉及的研究工作做出贡献的其他个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本学位论文原创性声明的法律责任巾木人承担。学位论文作者签名：I%4w//年r月/rn关于论文使用授权的说明本人完全了解中国兽医药品监察所有关保留、使用学位论文的规定，即：中监所有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或彳

3、H描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国兽民药品监察所可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议）研究生签名：时间：>//年及月/」'日时间：年《月/r日中国兽医药品监察所硕士学位论文摘要摘要猪圆环病毒2型（PorcineCircovirusType2，PCV2）是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(post-weaningmultisystemicwastingsyndrome,PMWS)等疾病的主要病原，给不少猪场造成了巨大的经济损失。为防控猪圆环病毒病，我国农业部自2010年批准了首个猪圆环病毒疫苗

4、猪圆环病毒2型灭活疫苗（SH株）之后，两年间又先后批准了LG株、DBN-SX07株、WH株和ZJ/C株全病毒灭活疫苗。截至目前，我国共批准了5个毒株的猪圆环病毒灭活疫苗，分别由16家生物制品企业生产。然而各个毒株疫苗的质量标准中的效力检验方法均不相同，许多疫苗仍在用传统的猪检法进行检验，面临着筛猪难且试验费时费力的问题，这势必造成检验监督机构在疫苗检测、监督和规范化管理的实施上难度加大，同时，SH株疫苗效力检验应用的小鼠免疫试验法虽最为简便快速，但缺乏规范化的参考品供应。因此，我们需要尽快研制出猪圆环病毒2型灭活苗参考品，为该类疫苗检验提供一把准确可靠的标

5、尺，规范疫苗的质量。本研究选择质量符合要求的猪圆环病毒2型灭活疫苗（SH株）成品作为该参考品的候选物，无菌分装于西林瓶中制备出该参考品，并对其各项特性值进行了测定，均符合要求。同时，对该参考品进行了仔猪攻毒试验，验证了参考品的保护效力，建立了参考品替代方法与传统方法的相关性，证明了该参考品可以作为PCV2灭活苗质量控制的实物标尺。随后，为了建立更加客观准确的疫苗效力检验体外替代方法，本研究摸索了该参考品进行荧光定量PCR检测时应用的最佳破乳方法，建立了进行猪圆环病毒2型病毒定量检测的荧光定量PCR方法，对其反应条件进行优化和验证，并探索了该方法作为疫苗效力

6、检验替代方法的可行性。结果表明，直接检测疫苗破乳水相中的病毒核酸拷贝数与小鼠免疫试验法测定结果之间具有高度相关性，该方法作为参考品效力检验替代方法具有很强的可行性。此外，针对各毒株疫苗效检方法各不相同的问题，本研究还对该参考品对其它毒株产品应用小鼠免疫试验法进行检验的参考覆盖性进行初步探索，以期将使该参考品成为多种毒株疫苗质量控制的通用标尺，但初步结果表明以当前的方法，该参考品不具有参考覆盖性，其正确应用方法尚待进一步研究和验证。最后，为获得更加准确的定值结果，组织了包括本实验室在内的4家单位进行协作标定，通过对各家试验原始数据的统计分析，将各单位测定的不

7、确定度引入到定值结果中，完成了猪圆环病毒2型灭活苗参考品的最终定值。关键词：猪圆环病毒2型灭活苗，参考品，仔猪攻毒试验，荧光定量PCR，协作标定I中国兽医药品监察所硕士学位论文ABSTRACTABSTRACTPorcineCircovirusType2(PCV2)isthemainpathogenofpost-weaningmultisystemicwastingsyndrome(PMWS),whichhascausedsevereeconomiclossestotheswineindustry.Topreventandcontrolthecontagio

8、nofPCV2,theMinistryofAgriculturea