杨燊.珠子参根部适合ssr标记的dna不同提取方法及保存方法研究分析

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1、...页眉珠子参根部适合SSR标记的DNA不同提取方法及保存方法的研究杨燊作者简介；杨燊（1990-），男，汉族，玉溪师范学院在校学生，2008034129（玉溪师范学院，资源与环境学院，08级生物科学，2008034129，玉溪653100）摘要：目的：探讨适合SSR标记的DNA不同提取方法及保存方法的最佳方法。方法：用经典CATB法,改良CATB法，SDS法，高盐低PH法，提取新鲜珠子参根部中总DNA，并对DNA进行电泳和紫外光检测得出最佳提取方法；选用最佳提取方法提取不同保存方法（新鲜材料、硅胶

2、干燥、自然阴干、太阳暴晒干燥）的总DNA，并对DNA进行电泳和紫外光检测得出最佳保存方法。结论：最佳提取方法为改良CATB法，最佳保存方法为新鲜材料，其次硅胶干燥和阴干的材料也适合SSR标记。关键词：珠子参；DNA提取；SSR分析；CATB法；SDS法；高盐低PH法珠子参(PanacisMajirisRhizama)属于五加科、串珠状根茎植物，别称钮子七、珠儿参、扣子七。分布于我国的四川、陕西、云南等省。具有活络、止血的功效[1-2]。现代药理学研究显示,珠子参具有较广泛的药理作用,对心血管系统、血液

3、及造血系统、免疫系统、肿瘤等均有作用[2]。因此珠子参具有极高的研究价值，所以本实验用珠子参作为材料进行实验。珠子参根部次生代谢产物较多，其中酚类多糖类物质会影响珠子参总DNA的提取及SRR分析。本实验主要为了选取适合SSR分析的DNA不同提取方法及保存方法的最佳方法，以便更加有效地提取珠子参总DNA。1材料与实验方法及操作1.1材料1.1.1实验材料实验材料取自大理市鹤庆县草海镇马厂的珠子参。该实验需要用到不同的提取方法及不同的保存方法，所以将各类方法和保存方法做如下标记：A、经典CTAB法，B、改

4、良CTAB，C、SDS法，D、高盐低PH值法，X、新鲜材料，G、硅胶干燥，Y、自然阴干，S、太阳暴晒干燥。1.1.2仪器离心机，水浴锅，冰箱，电泳仪，移液枪，RCP扩增仪，凝胶成像仪1.1.3试剂....页脚...页眉CTAB提取缓冲液：(10.00gCTAB，50.0mL1mol/LTris-HCl(pH8.0)，20.0mL0.5mol/LEDTA，41.00gNaCl，定容至500mL）；3%SDS提取缓冲液：(0.1mol/LTris-HCl（pH8.0），0.05mol/LEDTA-Na2，

5、SDS，定容至250mL)；去多糖Buffer：(100mlTris-HCl(1mol/L)，50mlEDTA(0.5mol/L），NaCl7.305g，定容至500ml)；高盐低PH值提取缓冲液：(0.1mol/L、pH=4.8NaAc,0.05mol/L、pH8.0EDTA-Na2，0.5mol/LNaCl，2%PVP，2%SDS，pH=5.5)；TE：(5ml1mol/LTris-HCl，1ml0.5molEDTA,定容至500ml)；3%琼脂糖凝胶：(0.6g琼脂糖,20ml1%TBE缓冲液)

6、；10X的TBE：（Tris碱108.00g，EDTA7.44g，硼酸55g,定容至1000ml）；40%的聚丙烯酰胺凝胶：（双丙烯酰胺2.00g，丙烯酰胺38.00g，定容至100ml）；6%的聚丙烯酰胺凝胶：（10xTBE12ml，40%聚丙烯酰胺凝胶18ml，90mlH2O）；银染所需试剂：（0.1%AgNO3溶液，3%Na2CO3溶液,10%HAc溶液,1%Na2S2O3溶液）；0.5mol/LEDTA，β-巯基乙醇，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，Tris饱和酚，氯仿/异戊醇(V/V=24:1)，

7、异丙醇，75%乙醇，琼脂糖，无水乙醇，5mol/LKAc，1X的TBE，TEMED，APS，硝酸，二甲苯氰，溴酚蓝1.2实验方法及操作1.2.1经典CATB法[3](有改动)(1)取3份新鲜珠子参每份0.5g分别放入3个研磨中加入1200μl65℃预热的CTAB提取缓冲液混匀；(2)迅速将1.5ml离心管置于65℃水浴中，保温60min,每隔15min温和颠倒混匀；(3)待冷至室温后，取出1.5ml离心管，取上清液于另一离心管，每管加入等体积的氯仿/异戊醇(24：1)溶液，混匀后至溶液呈乳浊状，100

8、00r/min离心10min；(4)小心将上清液相转移至另一个1.5ml离心管中，标号A1，A2，A3，在上清液中加入600μl预冷-20℃的异丙醇，轻轻混匀，至有白色絮状沉淀出现，-20℃静置保存1小时。(5)离心管从冰箱取出后10000r/min离心10min弃上清液，沉淀DNA；(6)用400μl75%的乙醇洗2次，7000r/min离心3min弃上清液；(7)然后再用400μl无水乙醇洗，7000r/min离心3min弃上清液，然后置于空气中干燥