青鱼mavs的克隆及功能初探

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1、硕士学位论文青鱼MAVS的克隆及功能初探学科专业细胞生物学学位类型□√科学学位□专业学位研究生姓名周维导师姓名、职称冯浩教授论文编号湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一五年六月湖南师范大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取襟的成果。除文中己经注明引用的巧容外，本论文不含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均臣在文中＾乂明确方式赫明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。＞＾。学位论文作者签名＊从年仁月／：日湖南师范大学学位论文版权使用授权书

2、本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属湖南师范大学。同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权湖南师范大学可Ｌ乂将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｌ乂采用影印、缩印或担描等复制手段保存和汇编本学位论文。＇作者签名：曰期如良年６月／口曰參貧？＾巧导师签葦日期年＾月口曰／分类号密级学校代码10542青鱼MAVS的克隆及功能初探Molecularcloningandapreliminarystudyonthefunction

3、ofMAVSfromblackcarp论文编号指导教师姓名、职称冯浩教授学科专业细胞生物学研究方向鱼类免疫湖南师范大学学位评定委员会办公室2015年6月摘要MAVS（线粒体抗病毒信号蛋白）在宿主细胞抵御微生物病原体的固有免疫应答中扮演着一个重要的角色。在这篇研究中，我们克隆了青鱼MAVS的cDNA全长序列，并对MAVS的功能进行了初步研究。青鱼MAVS全长cDNA由2352个核苷酸组成，由软件预测的MAVS蛋白包含有579个氨基酸，分子量为62.4kDa,等电点4.83。结构分析显示青鱼MAVS的功能性结构域包括N端CARD结构域（半胱氨酸蛋白酶激活和募集结构域），中间富脯氨酸结构

4、域，假定的TRAF2结合位点和C端跨膜结构域，这与哺乳动物的MAVS相类似。序列比对显示青鱼MAVS与其它已知的鱼类和哺乳动物的MAVS的CARD结构域有着很高的相似性(53.3%-97.6%),这也暗示了鱼类和哺乳动物的MAVS的CARD结构域具有保守性。青鱼MAVS在所有选定的组织中都有稳定表达，包括鳃、肾脏、心脏、肠、肝脏、肌肉、皮肤和脾脏;在GCRV和SVCV病毒感染后，肠、肝脏和肌肉组织中的青鱼MAVSmRNA水平明显提高，但是在感染GCRV和SVCV病毒的青鱼脾脏中的MAVS转录水平却下降了。在免疫印迹分析中，我们检测出青鱼MAVS蛋白在HEK293T细胞中外源表达的情

5、况下存在多带现象，这也与哺乳动物的MAVS相类似。免疫荧光分析表明I青鱼MAVS是一种线粒体蛋白，同时我们用双荧光报告分析发现在组织培养的情况下青鱼MAVS能够诱导斑马鱼干扰素和EPC干扰素的表达，接下来的青鱼MAVS在EPC细胞中的抗病实验也显示出在过表达青鱼MAVS的情况下，EPC细胞能有效抵御SVCV病毒侵染，表现出病毒斑减小，出现病毒斑时间推迟及病毒滴度相比于对照组减少的现象。这篇文章的数据为将来研究青鱼MAVS在固有免疫系统中的作用机制打下了坚实的基础。关键词：青鱼MAVS固有免疫IIAbstractMAVS(mitochondriaantiviralsignalingp

6、rotein)playsanimportantroleinthehostcellularinnateimmuneresponseagainstmicrobialpathogens.Inthisstudy,MAVShasbeenclonedandcharacterizedfromblackcarp(Mylopharyngodonpiceus).Thefull-lengthcDNAofblackcarpMAVS(bcMAVS)consistsof2352nucleotidesandthepredictedbcMAVSproteincontains579aminoacidswithaca

7、lculatedmolecularmassof62.4kDaandatheoreticalisoelectricpointof4.83.StructuralanalysisshowedthatbcMAVSiscomposedoffunctionaldomainsincludinganN-terminalCARD(caspaseactivationandrecruitmentdomain),acentralproline-richdomain,aputativeTRAF