黄芪甲苷联合5-氮胞苷诱导hucb-mscs分化为心肌样细胞并抑制其凋亡

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1、分类号密级－？ＵＤＣ６１０学校代码１０巧５義孝义拿硕±学位论文（专业学位）黄获甲普联合－氮胞普诱导５－ｈＵＣＢＭＳＣ＇。ｓ分化为肌样细胞并抑制其调亡？＇．研究生姓名：谢新林指导教师、职称：杨云华主任医师？＊－．：专业学位类别；）（领域）临床医学（儿科学研究方向；小儿也血管病所在学院一临床学院：南华大学第二０—五年五月＠南４义拿－ｈＵＣＢ－ＭＳＣ黄装甲尊联合ｓ氮胞普诱导ｓ分化为肌样细胞并抑制其调亡论文作者签名：谢新林指导教师签名：杨云华论文评阅人１一：罗永妓，主化睽师，南带大

2、学附属第戾院评阅人２：何少为，副韦件戾师，南化大学附属锅化麟院答辩委员会主席：李双杰，郵暢，硕导，湖南省化童民院委员１：奎劳君－－睽院，主任医师，硕导，南华大学附履第蚕员２：杨波一睽院，主任医师，硕导，南华乂举附屬領－委贵３：一展院唐Ｈ元，主任医师，硕导，南华大学附嵐第委员４一＝殷小成，主任睽师，硕巧，南华大举附摇错民院二〇－－答辩日期：巿年五Ｈ二十二ｙ南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈变的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加ｌｔｉ标注和致谢的地方外，论文中不包含其化或他证人书己经而发使

3、表或撰写妊的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。本人完全意作识者到签本声明的法律结果由本人承担。名：谢新林年０５月２２口南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻横’（博／硕）±学位期间在导师指导下完成单的位学位论文。本论文的研究成果巧南华大学所巧，本论文的研究内容不得其它有权化的名义发表。本人同意觸华大学有关保留、使用学位论文的规定，即；学校留学位论义，允许学位论文被杳阅和借阅；学校可臥公布学位论文的全部湖或部南省分有内容关部，可采用复印、缩印或

4、其它手段保留学位论文；学校可根据閨家或论文全文数据库ｎ规定送交学位论文。同意学校将论文加入《中国优秀博硕±学位－享受相关权益》，并按《中国优秀博硕上学位论文全文数掘库出版章程》规定位论文全文数据。同库意授权中国科学信息技术研究所将本学位论义收录到《中国学义》，并通过网络巧社会公众提供倍息服务。对于涉密的学位论，解密后适用该巧权。作者签＾＊名：谢新林１５年０５月２２日、＾导师签＾名：杨岩―＞５年０５月２２Ｈ＾黄芪甲苷联合5-氮胞苷诱导hUCB-MSCs分化为心肌样细胞并抑制其凋亡摘要目的:5-氮胞苷（5-aza）是一种间充质干细胞（MSCs）分化的有效诱导

5、剂，但存在较大的毒副作用。黄芪甲苷（AST）为黄芪制剂中的主要活性成分，也能诱导MSCs分化。本研究的目的旨在阐明AST联合5-aza对人脐血间充质干细胞（hUCB-MSCs）分化为心肌样细胞的影响，并探讨其对心肌细胞凋亡的保护作用。方法:1.采用密度梯度离心法结合贴壁培养法体外分离和培养hUCB-MSCs，流式细胞术鉴定hUCB-MSCs免疫表型抗原CD34、CD44和CD29。2.取第3代hUCB-MSCs，分别予培养基（空白对照组）、5μmol/L5-aza（低剂量5-aza组）、10μmol/L5-aza（高剂量5-aza组）及200mg/LAST+5μmol/L5-aza（AS

6、T+5-aza组）处理4周，显微镜下观察细胞形态学改变；采用免疫细胞化学染色法检测心肌肌钙蛋白T（cTnT）、Desmin表达；通过荧光实时定量PCR、westernblot分别检测心房利钠肽（ANP）mRNA、蛋白表达；行酶联免疫吸附法（ELISA）测定细胞内环磷酸腺苷（cAMP）含量。3.在hUC-MSCs诱导分化4周后，予高糖（33mmol/L）/葡萄糖氧化酶（2mU/mL）处理12h以诱导心肌样细胞凋亡，流式细胞术检测细胞凋亡率，westernblot检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:1.hUCB-MSCs表面抗原CD34阴性，CD44、CD29阳性。I2.诱导后细胞形态发生

7、显著变化；空白对照组未见cTnT、Desmin表达，高剂量5-aza组、AST+5-aza组cTnT、Desmin表达水平较低剂量5-aza组升高（P<0.01），但AST+5-aza组与高剂量5-aza组之间无区别（P>0.05）；高剂量5-aza组、AST+5-aza组ANP表达水平、细胞内cAMP含量显著高于低剂量5-aza组（P<0.01），但AST+5-aza组上述指标与高剂量5-aza组相比，差异无显著性（P>0.05）