adipophilin通过pkcδ抑制nceh促进巨噬细胞内脂质蓄积

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2、巧｜＾為璋Ｗ１；礎遙誤各；楚送，〇３巧＇終磕％导勃师炉砖占中化教逆！畫指导教师、＆、称：如權—－学科专业：基础医学義胃寶巧：病与病理生：；ｔ！！—４？‘心；．海ｒｉ據巧為該林梦蔡說冷—．扣争矣冷捶蒙ｔ恕：？＾訟与義ｒ苗＇提繞＇、占与黄舉义戀？義孝掌论文题目Ａｄｉｏｏｈｉｌｉｎ通过ＰＫＣ５抑制ｎＣＥＨ促进巨嗟ｐ细胞内脂席蓄积论文作者签名：蓋磊指导教师签名论文评阅人１：秦祀平，教樓，硕导，南华大学评阅人２：王春燕，副教授，硕导，南华大学答辩委员会主席：易化絕，教授，博导，南华大学委１：员刘录山，教授，硕导，南华大学

3、２；委员王化，教授，硕导，南华大学３委；员硕导明泻大，教授，，南华大学委４贵；韦星，副教授，硕导，南华大学：２０１５年５１６答辩日期月日Adipophilin通过PKCδ抑制nCEH促进巨噬细胞内脂质蓄积摘要：［目的］获得adipophilin通过nCEH促使细胞内脂质积聚的可靠证据，阐明adipophilin通过nCEH促使细胞内脂质积聚的机制，为动脉粥样硬化的防治寻找新靶点。［方法］将adipophilin沉默表达和稳定高表达的逆转录病毒质粒载体转染PA317包装细胞，收集病毒，感染RAW264.7细胞，筛选，制备高和沉默表达adipophil

4、in的细胞。在高和沉默表达adipophilin的RAW264.7细胞中，分别用RT-PCR和Westernblot检测nCEH的mRNA和蛋白表达的变化；高效液相色谱法检测细胞内胆固醇酯的含量。在高表达adipophilin的RAW264.7细胞中，用PKCδ激动剂0.1μmol/LPMA预孵育30min后，或者用PKCδ特异性抑制剂0.1μmol/LRottlerin预孵育30min后，分别用RT-PCR和Westernblot检测nCEH的mRNA水平和蛋白表达的改变；高效液相色谱法来检测细胞内胆固醇酯含量。［结果］在高表达adipophilin的RAW264.7细胞中，

5、胆固醇酯的含量明显增加，在沉默表达adipophilin的RAW264.7细胞中，胆固醇酯的含量显著减少；同时，adipophilin能够抑制nCEHmRNA和蛋白的表达；在高表达adipophilin的RAW264.7细胞中，用PKCδ激动剂0.1μmol/LPMA预孵育30min后，nCEH的mRNA与蛋白表达水平明显降低，用PKCδ特异性抑制剂0.1μmol/LRottlerin预孵育30min后，nCEH的mRNA和蛋白表达水平显著增高。［结论］高表达adipophilin促进巨噬细胞内胆固醇酯的蓄积，抑制nCEHmRNA和蛋I白的表达；adipophilin通过PKC

6、δ抑制nCEH促进巨噬细胞内脂质蓄积。关键词：脂肪分化相关蛋白；中性胆固醇酯水解酶；蛋白激酶C；胆固醇酯；动脉粥样硬化IIIADIPOPHILINENHANCECELLULARCHOLESTERYLESTERBYINHIBITINGnCEHACTIVITYTHROUGHPKCδINMACROPHAGESLeiMeng(PathologyandPathophysiology)DerectedbyProf.ZhonghuaYuanAbstract:［Objective］ToobtainreliableevidencebyadipophilinnCEHinduceintracellu

7、larlipidaccumulationbyadipophilin,clarifythemechanismofnCEHinduceintracellularlipidaccumulation,findnewtargetsforthepreventionandtreatmentofatherosclerosis.［Methods］Adipophilinsilencingandretroviralplasmidstablehighexpressionvectorwastransfectedint