bsa中的酪氨酸残基在bsa抑制heme损伤细胞中的作用研究

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1、分类号学号M201270201学校代码10487密级硕士学位论文BSA中的酪氨酸残基在BSA抑制heme损伤细胞中的作用研究学位申请人：王培培学科专业：无机化学指导教师：李海玲副教授高中洪教授答辩日期：2015年5月26日AThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofEngineeringExperimentalStudyonIgnitionwithOxygen-enrichedAirforEffervescentAtomizationOilGun

2、Candidate:WangPeipeiMajor:InorganicChemistrySupervisor:AssociateProf.LiHailingProf.GaoZhonghongHuazhongUniversityofScience&TechnologyWuhan430074,P.R.ChinaMay.,2015独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明

3、确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在____________年解密后适用本授权书。本论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日华中科技大学硕士学

4、位论文摘要血红素（heme）是生物体内广泛存在的蛋白质辅基，它是血红蛋白、肌红蛋白、脑红蛋白等的主要稳定结构和辅基，所以其在生物体内有非常重要的生理功能。但是，当病理状态下发生严重溶血，游离的血红素浓度超过机体防御机制的承受能力时，过多的游离血红素会氧化损伤DNA、蛋白质、脂质等，对机体造成损伤。在H2O2和亚硝酸盐存在的环境下，血红素能催化蛋白质酪氨酸硝化加重机体的损伤。血清白蛋白（SA）是血浆中含量最丰富的载体蛋白，在机体内有很多重要生理功能。血清白蛋白独特的分子结构使其在血液循环系统中能结合和运输多种多样的内源性和外源性化合物。血红素和血清白蛋白

5、（SA）有很强的结合能力，SA与heme的结合使SA参与了heme的代谢和解毒作用，但其确切的解毒机理尚不完全清楚。本文在细胞水平上研究了BSA中的酪氨酸残基在BSA解毒heme的作用中的贡献。首先制备碘修饰了酪氨酸残基的牛血清白蛋白（BSA-T），并通过紫外光谱特性验证了修饰的成功，然后用TMB法检测了heme-BSA和heme-（BSA-T）复合物的过氧化物酶活性，再以神经母瘤细胞SHSY-5Y细胞为细胞模型，采用MTT法和-Hoechst33258法研究BSA和BSA-T对heme-H2O2-NO2体系对细胞活力的损伤、凋亡形态的干预作用。接着分

6、别采用免疫荧光法和蛋白质免疫印迹法研究BSA和BSA-T-对heme-H2O2-NO2体系造成的细胞内蛋白质氧化和硝化损伤的影响程度。最后采用-TAB法研究BSA和BSA-T对heme-H2O2-NO2体系引起的细胞内脂质过氧化氧化程度的干预作用。研究结果表明，BSA中的酪氨酸残基修饰后，对复合物BSA-heme的过氧化物酶活性无明显影响。heme-H2O2同时存在的条件下，会对细胞造成损伤，会增强细胞蛋-白质的氧化、硝化以及细胞内脂质过氧化的程度，而NO2的加入会进一步加重细胞损-伤。而BSA和BSA-T会对heme-H2O2-NO2体系造成的一系列

7、损伤均有一定程度的抑制作用，但是BSA-T的抑制作用弱于BSA。以上结果说明，在BSA对heme催化的细胞氧化和硝化损伤的抑制作用中，BSA中的酪氨酸残基有重要贡献。关键词：血红素；牛血清白蛋白；蛋白质硝化；蛋白质氧化I华中科技大学硕士学位论文AbstractHemeisawidespreadproteincofactorinvivo.Itisthemainstablestructureandproteincofactorofhemoglobin,myoglobin,brainprotein,etc.Soitplaysaveryimportantphy

8、siologicalfunctioninlivingorganisms.However,whe