mtor信号通路在蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中的作用及机制研究

《mtor信号通路在蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中的作用及机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、SOOCHOWUNIVERSITY七年制专业学位论文论文题目mTOR信号通路在蛛网膜下腔出血后早期脑损伤⑵七作用及机制研究研究生姓名徐祥指导教师姓名王中专业名称临床医学研究方向外科学(神经外科)论文提交日期2015年5月mTOR信号通路在蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中的作用及机制研究中文摘要mTOR信号通路在蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中的作用及机制研究中文摘要目的：哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammaliantargetofrapamycin,mTOR）是一种进化上相对保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，参与体内多种生物过程，包括自噬、蛋白合成

2、、脂质合成、肌动蛋白动力学、神经元形态学等。蛛网膜下腔出血（subarachnoidhemorrhage,SAH）后脑损伤的机制甚多，小胶质细胞的激活在其中作用显著。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白对细胞的增殖活化有明显的促进作用。迄今尚没有关于mTOR在SAH后小胶质细胞激活中的作用研究。目前研究表明蛛网膜下腔出血后mTOR信号通路激活、小胶质细胞激活。但其作用机制还有待进一步探讨。为此，在本研究中，我们第一次探讨蛛网膜下腔出血后mTOR信号通路在不同时间的的表达，并研究了抑制该信号通路能否改善蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤（earlybrai

3、ninjury,EBI）及其可能机制。研究方法：24只健康成年雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为4组，每组6只，假手术组，SAH-3h组，SAH-24h组，SAH-72h组。主要探究蛛网膜下腔出血模型中mTOR通路的时间点表达。将72只SD大鼠分为四个组，sham组18只，SAH+溶剂组18只，SAH+雷帕霉素组18只，SAH+AZD8055组18只。本实验采用视交叉前池注血模型：SD大鼠视交叉前脑室20秒内注入0.3ml无肝素动脉血，从而建立实验性蛛网膜下腔出血动物模型。在SAH+雷帕霉素组中，模型建立的第4个小时

4、，腹腔注射雷帕霉素（150ug/kg）。SAH+AZD8055组中，同样在建模后第4小时，AZD8055以14mg/kg剂量腹腔注射。SAH动物模型建立完毕的第24小时处死大鼠，取出大鼠额颞底皮层脑组织做标本，采用蛋白质印迹（western-blot）分析脑组织中mTOR信号通路表达情况，免疫荧光染色来分析小胶质细胞的表达，干湿法测定水肿指数，western-blot分析脑组织中白蛋白含量来评价出血后的血脑屏障（blood–brainbarrierBBB）的通透性，TUNEL与FLUORO-JADEB荧光染色测定神经细胞的凋亡及坏死比

5、率，相关的试剂盒来测定新鲜脑组织中细胞因子释放。I中文摘要mTOR信号通路在蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中的作用及机制研究结果：通过各种之间的蛋白表达水平的比较，得出蛛网膜下腔出血后，mTOR及其下游P70S6K总量无明显变化（P>0.05），但其磷酸化水平显著增高（P<0.05），并在第24小时达到最高。免疫荧光结果显示：与正常组相比，安慰剂SD大鼠皮质小胶质细胞显著激活（P<0.01），雷帕霉素及AZD8055组SD大鼠与安慰剂组SD大鼠相比，小胶质细胞表达显著降低（P<0.05），雷帕霉素与AZD8055组间无明显差别（P>0.0

6、5）。ELISA结果显示：与正常组相比，安慰剂SD大鼠皮质TNF-α、IL-1β含量明显增高（P<0.05），雷帕霉素及AZD8055组SD大鼠与安慰剂组SD大鼠相比，小胶质细胞表达显著降低（P<0.05），雷帕霉素与AZD8055组间无明显差别（P>0.05）。免疫蛋白印迹结果显示：p-mTOR，p-P70S6K，p-4EBP1在正常组低表达，与正常组相比，安慰剂组样本上上述蛋白表达水平明显增高（P<0.01），而雷帕霉素及AZD8055组与安慰剂组相比上述蛋白表达明显减少（P<0.05）。雷帕霉素、AZD8055一定程度上减轻了S

7、AH后的早期脑损伤，包括了细胞凋亡、坏死、脑水肿以及血脑屏障破坏指标。结论：蛛网膜下腔出血后，mTOR信号通路被激活，雷帕霉素、AZD8055通过抑制mTOR信号通路从来一定程度上减轻了SAH模型中早期脑损伤，这有可能是通过抑制小胶质细胞的激活来实现的。关键词：蛛网膜下腔出血,早期脑损伤,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白，小胶质细胞，炎症。作者：徐祥指导老师：王中教授IImTOR信号通路在蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中的作用及机制研究英文摘要Theroleofmammaliantargetofrapamycinonearlybraininjury

8、afterexperimentalsubarachnoidhemorrhageanditsmechanismresearchAbstractBackground:Mammaliantargetofrapamycin(mT