sirna干扰cx37对鼠胃癌皮下移植瘤的影响

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1、襄ｗ、爭ＳＯＯＣＨＯＷＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ博ｉ专业学位论文论文题目ｓｉＲＮＡ干扰Ｃｘ３７对鼠胃癌皮下移植瘤的影响＝＾研究生姓名景元明指导教师姓名钱海蠢专业名称胃肠外科硏究方向胃肠肿瘤论文提交日期２０１５年３月Ｉ苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明；所提定的学化论文是本人在导师的指导下，独立进巧研究王作所取得的成果。除义牛己经注明引巧的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的硏究成果，也不普为获得苏州大学或其芭教育机构的学恆化书而使用进的材料。对本文的研究作出重要黄

2、献的个人和集体，均已在文中凹明确方式标明。本人承担本芦明的法律责任。＾＾／＾论文作者签名＾＾＾日期：２〇（＾小心广ＪＶ－■／苏州大学学位论文使用授权黄明本人审？ｒＭ姐巧人巧；化化、帖存和僅／ＴＴｆ化运义的规比．巧］－；巧化洽义作化化州乂巧。冰巧化皮义化ｆ义巧的内胖和化城论义的内存Ｗ巧’。祖州火巧ｌＶ／权ｆｉｌｄｗ糸聞Ｉｗ、中［过社科防义献扭化化中也－、中Ｗ科申技术枯、．扯却ｍ巧（货／ｊＶｊ圾贴化丫Ｉ！！极化）中闲巧木期刊＜化扣版）电＾前山礼巧交本巧化必义的缸印忡巧化广义村｜化巧记义巧巧间和化闷＊＂１！＾采阳味印、缩

3、印过化他＾＾制子－段保枯巧和汇骗节化记义，＂＂苗将巧化＆文的帝部诚部好内巧骗入朴关巧怖址巧检嗔。本学化论文成非涉密论文□论文作巧巧名日期：导师《名：Ｂ巧；舞siRNA干扰Cx37对鼠胃癌皮下移植瘤的影响中文摘要siRNA干扰Cx37对鼠胃癌皮下移植瘤的影响中文摘要第一部分筛选Cx37基因的有效siRNA干扰序列目的：筛选有效Cx37-siRNA干扰序列。方法：根据Cx37基因序列设计siRNA干扰片段，与Cx37基因过表达载体共转染HEK293细胞，检测Cx37基因蛋白表达水平，确定有效Cx37-siRNA干扰序列。结果：通过Weste

4、rn-blot分析，从三种不同的Cx37-siRNA中确定了2条可有效抑制Cx37基因蛋白表达的siRNA序列。选择Cx37-siRNA-3片段，进行下游siRNA干扰序列慢病毒表达载体及慢病毒颗粒的构建。结论：成功筛选Cx37基因的有效siRNA干扰序列。第二部分构建携带Cx37-siRNA有效干扰序列载体的慢病毒颗粒及MFC胃癌细胞小鼠皮下移植瘤模型目的：构建MFC胃癌细胞小鼠皮下移植瘤模型，向瘤体注射携带Cx37-siRNA有效干扰序列载体的慢病毒颗粒，并确定Cx37基因表达的抑制情况。方法：利用RPMI1640完全培养基培养MFC小鼠胃癌细胞系。在30只雌

5、性7BALB/c-nu/nu小鼠前肢皮下接种0.2mlMFC小鼠胃癌细胞悬液（2.5×10cells/ml），建立皮下移植瘤模型。将小鼠随机分成3组，分别向实验鼠瘤体内注入携带Cx37-siRNA的慢病毒颗粒、携带阴性对照-siRNA的慢病毒颗粒和生理盐水。实验终结时，测量3组小鼠体重及移植瘤。用10%中性福尔马林溶液固定移植瘤，石蜡包埋后切片，进行苏木精-伊红染色，并用荧光显微镜观察Cx37-siRNA载体中GFP基因蛋白表达及分布情况。提取小鼠移植瘤总RNA和总蛋白，通过RT-PCR和Western-blot法检测Cx37mRNA和蛋白表达水平。I中文摘要si

6、RNA干扰Cx37对鼠胃癌皮下移植瘤的影响结果：利用荧光显微镜可见瘤体内存在GFP蛋白的大量表达，提示携带Cx37-siRNA的慢病毒转染成功。各组小鼠体重无明显差异。Cx37-siRNA组移植瘤中Cx37基因mRNA的表达水平明显低于mock-siRNA组和生理盐水组（P<0.05），Cx37基因mRNA表达水平在mock-siRNA组和生理盐水组之间无明显差异。Western-blot分析显示，Cx37-RNAi组移植瘤中Cx37蛋白表达水平明显低于mock-siRNA组和生理盐水组（P<0.05）。结论：向MFC胃癌细胞小鼠皮下移植瘤中注射携带Cx37-si

7、RNA有效干扰序列载体的慢病毒颗粒有效抑制了Cx37基因表达。第三部分干扰MFC胃癌细胞小鼠皮下移植瘤中Cx37基因表达对瘤体细胞增殖和凋亡的影响目的：明确注射Cx37-siRNA慢病毒对MFC胃癌细胞小鼠皮下移植瘤瘤体细胞增殖和凋亡的影响。方法：按照第二部分的实验方法，利用40只雌性BALB/c-nu/nu小鼠构建MFC胃癌细胞小鼠皮下移植瘤模型，随机分成4组：未注射组、Cx37-siRNA组、mock-siRNA组和生理盐水组。分别向后三组实验鼠瘤体内注入携带Cx37-siRNA的慢病毒颗粒、携带阴性对照-siRNA的慢病毒颗粒和生理盐水。8周后，利用CCK8

8、方法检测各