东乡野生稻苗期耐冷主效qtl的精细定位及克隆

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1、－２〇３ｙ分炎ｙ７巧ｉ）ｉＩＩ）（幣巧＾３＾毯叫大聲ｆｅＹＡＮＣｉＺｌＩＯＵＵＮＩＶｈＲＳｎＹＩ博壬学佐冷文东乡野生精苗期耐冷主效ＱＴＬ的精细定位及克隆宵宁２２５００９指导教师姓名：炼建民教授，扬州大学，江苏扬州，申请学位级别：博去学科专业名称：植物学＿＾论文提交日期：２０１５．０４．０９论文答辩Ｈ期：２０１５．０５．２３，学位授予单位：场州大学学位授了日期：２０１５．０６．３０答辩委员会主席：马鸿翔２川５年０６月目录摘要１符号说明７一第章文献综述８前胃８１．水稻冷害生理反应

2、８２．水稻耐冷ＱＴＬ定位的研究进展９２．１芽期耐冷ＱＴＬｓ定位１４２．２苗期耐冷ＱＴＬｓ定位１４２．３生殖生长期耐冷ＱＴＬｓ定位１５３１６水稻耐冷的分子机理Ｖ３．１Ｃ公Ｆ调控途径１７３．２ＭＴＳ调控途径１８４．东乡數生稻野生稻耐冷基因的挖掘与利用１９５１９．本研究的目标和意义第二章东乡野生稻野生稻苗期耐冷ＱＴＬ的巧步定位２１１２２．材料和方法１．１初步定位黯体的构建２２１．２水稻基因组ＤＮＡ的小量制备２２１．３单株标记基因型鉴定２２１．４苗期耐冷表型鉴定２３１２３．４．１存活率统计

3、１．４２２４．叶片渗透势测定１．４．３根电导率测定２４１５２４．统计分析２．结果２４２２４．１冷胁迫条件的筛选２２６．２ＢＣ２Ｆ１定位群体的耐冷表型２３、、Ｌ２７．存活率叶片渗透势根电导率ＱＴ的初步定位３対论２９－３３０．１ｇ皮Ｃｉ０２是可靠的耐冷主效ＱＴＬ３．２ｇ王ＯＰ２、ｇ戶说是可靠的耐冷主效ＱＴＬ３１＞第Ｈ章ｇ王饼２的精细定位３３１．材料与方法３３１．１精细定位群体构建巧１、３４．２次级定位群体精细定位定位辭体基因型鉴定１３重组单株耐冷表型鉴定３５１．４候选基因的转录表达分析３５１３

4、６．５统计分析２．结果３６－２％．１９户５化２八知戶２耐冷效应的验证２．２、９王０戶２区段多态性引物筛选３７－八精细定位２．３ｇ户如２巧－八候选基因冷胁迫表达分析２．４戶础２３９ｇ３．４０ｉ？Ｃ７０－２的、第四章ｇ精细定位克隆队及育种价值评价４２１？材料和方法４３１．１精细定位群体构建４３１．２精细定位定位群体基因型鉴定４３１３４４．耐冷表型鉴定１．３．１苗期耐冷表型的鉴定４４１４４．３．２成熟期耐冷表型鉴定１４４５．候选基因的转录表达分析１．５候选基因的分离与克隆４５１．６候选基因的转化

5、４６１４６．６．１水稻愈伤组织的诱导１．６．２愈伤组织的侵染、选择筛选４６１．６．３转化苗的产生和移栽４７１．７转基因阳性苗检测４７１４．８转基因阳性苗的耐冷评价７２．结果与分析４７２－．１如０２区段多态性引物筛选４７－２．２抑＾０２精细定位４８２３位点成熟期耐冷评价５０．２化心０－．４２候选基因结构分析５３９－２．５如？Ｃ／０２候选基因冷胁迫应答分析５４－２０２５４．６如？Ｃ／候选基因功能验证３Ｍｉ＾５６第五章本研究主要结论、创新点和下阶段研巧打算５９５．１主要结论５９５．２创新点５９

6、５３６０．下阶段研巧打算参考文献６２附录７０附录１水稻转化中使用的培养基成分：７０附录２７２ＳＳＲ标记及遗传距离致谢７４支持项目及已发表文章７５肖宁东乡野生稻苗期耐冷主效ＱＴＬ的精细定位及克隆１东乡野生稻苗期耐冷主效ＱＴＬ的精细定位及克隆摘要：冷害是指环境温度低至最适生长临界点Ｗ下时造成植物机体代谢和生理不可逆的伤害，水稻苗期冷害引起植株生长缓慢、死苗等现象，目前己经成为影响世界粮食稳定生产的自然灾害。因此，挖掘水稻耐冷种演资源，研究水稻耐冷分子机理Ｗ及提供可靠的分子标记辅助选择ＱＴＬ位点，对培育水稻耐冷品种和

7、保证粮食安全生产具有重要意义。’本研巧利用耐冷亲本东乡野生稻（Ｑｎ｛／皆ｏｇｏｒａ）与南京１１（０．ｓａｔｏｖｚａ）构建的ＢＣ２Ｆ１初步定位群体，！＾苗期幼苗存活率、叶片渗透势和根电导率为耐冷指标，通过复合区段法分别在第２、５、８、１０染色体上定位到７个与耐冷相关－的。其中，与存活率相关的妒欲２７、戶端位于第２号染色体上ＯＤＱＴＬｇ，Ｌ值分别为３．３、３．１，贡献分别为１２．３％、９