云南牛肝菌的分子鉴定及其多糖抗氧化性研究

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1、硕士学位论文云南牛肝菌的分子鉴定及其多糖抗氧化性研究StudiesonmolecularidentificationandantioxidantactivityofpolysaccharidesofBoletusinYunnan二〇一五年五月分类号：UDC:密级：保密年限：年云南牛肝菌的分子鉴定及其多糖抗氧化性研究StudiesonmolecularidentificationandantioxidantactivityofpolysaccharidesofBoletusinYunnan学科门类：理学_____________学科专业：有机化学__________论文作者：岳万松_______

2、____指导教师：陈毅坚___________培养单位：化学与生物技术学院原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：i签字日期：年5■月季关于论文使用授权的说明学位论文作者完全了解云南民族大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属云南民族大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版

3、，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以允许采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后遵守此规定）学位论文作者签名：签字日期：ZP/T年J"月43导师签名：陈故篡签字日期：年_r月Y日摘要摘要牛肝菌是一种著名的食药两用真菌，我国云南牛肝菌分布广、种类多，是牛肝菌资源的自然分布中心，但由于各种人为和自然因素的影响，使得我国牛肝菌的种质资源受到严重破坏，多样性逐渐下降。我国对牛肝菌资源的利用虽有悠久的历史，但对该资源的分类鉴定、有效保护及综合开发利用研究均仍较为滞后，对牛肝菌资源的了解十分有限。本研究比较研究了采自云南玉溪、楚雄、曲靖和文

4、山4个地区的13个牛肝菌样品的形态特征差异，并采用rDNAITS序列分析、rDNAIGS1序列分析、ITS-RFLP以及IGS1-RFLP等多种分子标记相结合的分子生物学分析手段对13个牛肝菌样品进行分子鉴定和遗传差异分析。本研究将形态学分类法和分子分类法相结合研究了牛肝菌的遗传多样性以及品种间亲缘关系，同时，本论文通过组织分离法得到牛肝菌内生真菌并通过ITS序列分析对其进行分类鉴定，还对牛肝菌主要活性物质多糖的体外抗氧化活性进行了实验研究。以上各方面的研究结果以期为云南牛肝菌资源的有效保护、合理开发和综合利用提供基础资料和科学依据。主要结论如下：（1）本研究根据所得样品的形态特征，并采用rD

5、NAITS序列分析、rDNAIGS1序列分析、ITS-RFLP以及IGS1-RFLP等多种分子标记相结合的分子生物学分析手段对13个牛肝菌样品进行分子鉴定和遗传差异分析，结果表明，用几种不同的分子标记技术获得的分类结果基本吻合，相互印证。其中ITS和IGS1序列聚类分析均将13个样品聚类为7个不同类群，两种方法聚类结果完全统一，且与传统的形态分类结果基本一致。ITS序列分析作为牛肝菌鉴定鉴别的一种普遍有效的分子手段，能将云南不同产地的13个牛肝菌样品鉴定到属甚至种的水平。此外，研究还发现IGS1序列与ITS序列分析具有同样的鉴定效果，IGS1序列分析也可以作为牛肝菌分类鉴定的一种新的分子手段；

6、本项目还开展了对ITS序列二级结构的研究，rDNAITS序列的RNA二级结构水平的分析鉴定结果与ITS序列聚类分析结果也相统一，所以ITS的RNA二级结构分析也可作为ITS序列分析的一种辅助手段，二者相结合能为牛肝菌的分子鉴定提供更加丰富和准确有效的“分子形态信息”；ITS-RFLP指纹图谱分类结果和IGS1-RFLP指纹图谱分类结果分别与对应的ITS聚类分析结果和IGS1聚类分析结果基本吻合，I云南民族大学硕士论文可见ITS-RFLP和IGS1-RFLP指纹图谱的构建同样可以作为ITS和IGS1序列分析的一种有效的辅助分析手段，可以直接有效的对13个样品的亲缘关系进行初步分类鉴定。实验研究中

7、还发现个别牛肝菌样品的ITS序列较保守，在2种限制性内切酶的酶切图谱中没有明显的限制酶切片段长度多态性，因此需要结合其它种类的内切酶来研究牛肝菌的ITS-RFLP，以便将未能区分开的几个种区别开来。总之，采用多种现代分子生物学研究方法再和传统的形态学分类法相结合，可为云南牛肝菌的分类鉴定研究和遗传多样性分析提供更加丰富和全面有效的分子信息，且二者的结果相互印证，更加准确可靠。（2）选取所得样品中4