亚硒酸钠诱导hepg2细胞胰岛素抵抗的作用及机制研究

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1、分类号学号M201270203学校代码10487密级硕士学位论文亚硒酸钠诱导HepG2细胞胰岛素抵抗的作用及机制研究学位申请人：闫军燕学科专业：无机化学指导教师：周军副教授答辩日期：2015年5月26日AThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreefortheMasterofScienceSeleniteinducesinsulinresistanceinHepG2cells:theunderlyingmechanismsCandidate:Jun

2、yanYanMajor:InorganicChemistrySupervisor:Asso.Prof.JunZhouHuazhongUniversityofScienceandTechnologyWuhan,Hubei,430074,P.R.ChinaMay,2015独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到，本声明的法

3、律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在____________年解密后适用本授权书。本论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日华中科技大学硕士学位论文摘要硒是哺

4、乳动物的一种必需微量元素。研究表明，硒具有类胰岛素作用；而近来越来越多的研究表明，缺硒和硒过量会促进糖尿病的发生发展，但内在的机理仍然知之甚少。胰岛素抵抗在2型糖尿病的发病机理中极其重要。因此，硒与胰岛素抵抗之间关系的研究对深入了解硒与糖尿病的关系具有重要意义，对预防和治疗2型糖尿病具有潜在的应用价值。本文以亚硒酸钠Na2SeO3处理的HepG2细胞为研究对象，研究了亚硒酸钠对胰岛素效应与信号通路的影响及其机制，重点探讨了高浓度亚硒酸钠（1μM，2.5μM和5μM）对HepG2细胞的糖代谢（包括糖原合成和糖异生）、肝脏细胞中胰岛素信

5、号通路、氧化应激水平、内质网应激水平的影响，主要结果如下：我们采用糖原试剂盒、实时荧光定量PCR技术、蛋白质印迹技术、分光光度法、活性氧试剂盒，研究了亚硒酸钠对HepG2细胞胰岛素信号通路的影响及可能的机制。结果表明，高浓度亚硒酸钠使得HepG2细胞内糖原含量降低，促进了糖异生基因的表达，降低了Akt的磷酸化水平。这说明高浓度亚硒酸钠导致胰岛素敏感性降低，抑制胰岛素信号传导，引起胰岛素抵抗。亚硒酸钠的加入没有改变GRP78的表达，说明在HepG2细胞中，亚硒酸钠可能不是或主要不是通过内质网应激引起胰岛素抵抗的。高硒处理使细胞中ROS

6、含量增加，加入抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine,NAC）可以降低高硒引起的ROS水平升高。NAC的加入可以逆转由亚硒酸钠导致的糖原合成减少和糖异生基因表达增加，这说明亚硒酸钠是通过ROS作用于胰岛素信号通路的。同时NAC的加入使得Akt磷酸化水平升高，JNK磷酸化水平降低，IRS1酪氨酸磷酸化水平升高，说明ROS的减少能够增强胰岛素信号，ROS通过激活JNK而导致IRS1酪氨酸磷酸化降低而抑制胰岛素信号转导，引起胰岛素抵抗，抑制糖原合成，促进糖异生。我们的实验结果表明，亚硒酸钠通过诱导HepG2细胞中产生R

7、OS，激活JNK，通过抑制IRS1的酪氨酸磷酸化而抑制胰岛素信号转导，引起胰岛素抵抗。I华中科技大学硕士学位论文关键词：2型糖尿病，胰岛素抵抗，亚硒酸钠，氧化应激，N-乙酰半胱氨酸II华中科技大学硕士学位论文AbstractSeleniumisanessentialmicronutrientinmammals.Seleniumwasfoundtohaveseveralinsulin-likeeffects.Recentstudiesshowthatlowandhighseleniumintakebothincreasetheinci

8、denceoftype2diabetes.Howevertheunderlyingmechanismremainspoorlyunderstood.Insulinresistanceholdsanextremelyimportantp