人脐带间充质干细胞的免疫调节能力的标准化与量化研究

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1、京碱如皆聲庇硕±研究化学位论文臟北京协和医学院研究生院学校代码：１００２３学号：Ｓ２０１２０１４０１３硕±学位论文人龄带间充质干细胞的免疫调节能力的标准化与量化研究Ｔｈｅｓｔａｎｄａｒｄｉｚａ杜ｏｎａｎｄｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｓｔｕｄｏｎｔｈｅｑｙｍｕｎｏｄｕ－ｉｍｌａｔｏｉｙｅｆｆｅｃｔｏｆＨｕｍａｎｕｍｂｉｌｉｃａｌｃｏｒｄｄｅｒｉｖｅｄｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ所院；血液学研究所姓名；吴禾禾指

2、导教师；韩忠朝教授导师小组：中法实验室组学科专业：内科科研研巧方向：干细胞１完成日期：２０５年４月北京协和医学院中国医学科学院硕±研巧生学位论文目录一第部分：标准化的无血清培养体系对人厮带来源间充质干细胞免疫调节活性的影咱１中文摘要英ｔ摘要３：５前胃材料与方法６１９ｉｔｉｆｅ２９结３０参考文献３１第二部分：定量评估不同个体人廝带间充质干细胞的免疫调节能力３４中文摘要英文摘要３６前Ｂ３８材

3、料与方法３９结果５０５７職５８参考文献５９一主要仪器材料及试剂附录６１附录二主要溶液的配置６４附录Ｈ常见英文缩写和代码６５附录四在学期间发表文章６６致谢６７北京协和医学晚中国医学科学院硕±研究生学位论文第一部分标准化的无血清培养对人廝带来源间充质干细胞免疫调节活性的影响摘要背景！旅带来源间充质干细胞（ｈｕｍａｎＵｍｂｉｌｉｃａｌＣｏｒｄＭｅｎｓｅｎｄｉｙｍａｌＳｔｅｍＣＵＣ－ｅｌＭＳＣ，，ｌｈｓ）具有更强更稳

4、定的増殖分化能力来源方便充足对供者无伤，ｈＵＣ－ＭＳＣ害，ｓ，，病原微生物感染率低安全性髙。具有较高的免疫调控能力是临床治疗血液疾病安全性高的异体干细胞。目前，传统的ＭＳＣｓ培养体系中含有一（ｅｒｕｍＣｏｎｔａＭｅｄｉ定比例的动物血清Ｓｉｎｉｎｇｕｍ）成分，对间充质干细胞的临床应用造成安全隐患。ｈＵＣ－ＭＳＣｓ增殖、衰老本研巧对比无血清与有血清培养体系培养的、细胞表面及全能标志物、多向分化潜能，重点关注了两个培养体系在免疫抑制方面的不－ＭＣ同，探索培养ｈＵＣＳｓ的标

5、准化方法，达到临床的应用标准。目的；验证不同个体巧带来源间充质干细胞在无血清培养体系中培养的安全。性Ｗ及免疫调节作用，安全的应用于临床治疗方嵌ＵＣ－ＭＳＣｓ（１）比较ｈ在有血清与无血清培养体系体外长期传代Ｗ及衰老情况，测定生长曲线；长期传代至终末期，采用ＣｅｌｌｕｌａｒＳｅｎｃｅｎｃｅＡｓｓａｙＫｉｔ检２）－ＭＳＣ（ｈＵＣｓ测衰老相关的Ｐ半乳糖巧酶的活性；流式检测在有血清与无血清－（３）ｈＵＣ培养体系体外培养其细胞表面分子标志Ｗ及全能标志物的检测；对比ＭＳＣｓ在有血

6、清与无血清培养体系体外培养其多向分化能力情况；（４）通过健康成人外周血激活期和静止期的ＮＫ细胞分别与不同个体不同培养体系培养的ｈＵＣ－－ＮＫ细ＭＳＣｓ圧Ｎ，评价对固有免疫的调节共培养，流式检测ｙ阳性的胞的百分比（５ｈＵＣ－ＭＳＣ作用）通过ＢｒｄＵ酶联免疫吸附法对比两个培养体系培养的ｓ对；ＰＢＭＣ增值的抑制能力（６）比较ｈＵＣ－ＭＳＣｓ在有血清与无血清培养体系体外培；ＵＣ－ＭＳＣｓ和健康成人外养后免疫抑制能为，通过不同个体不同培养体系培养的ｈ－周血单个核细胞共培养ＩＦＮ的分泌水

7、平，检测，利用免疫酶联试剂盒检测上清中Ｙ－－瓜０、比－６ＲｔＰＣ艮ＴＮＦｔａ、上清中ＰＧＥ２、的分泌，ｅａｌｉｍｅ检测免疫相关因子ｂｅ－－－忙－１－２７、Ｇａ）ｍＲＮＡ０、正ｌｅｃｔ１、ａｅｃｔｎ３、正０１、ＣＯＸ、６ｉｎＧｌｉ２ＨＧＦ及比等的表达水平。ＵＣ－ＭＳＣ，结果：（１）无血清培养的ｈｓ呈典型的长梭形贴壁细胞与有血清培－ＭＳＣｓ相比生长曲线较平缓，养的ｈＵＣ，对数生长较晚较早出现Ｐ半乳糖昔酶的－２９活性（２）无血清培养与有血清培养的ｈＵＣＭＳＣｓ均高表达ＣＤ

8、，ＣＤ４４ＣＤ７３；，，ＣＤ９０，ＣＤ１０５及ＣＤ１０６等间充质干细胞的表面标记，不表达ＣＤ３４，ＣＤ４５，ＣＤＵｂ，９ＨＬＡ－Ｄ民－ＭＳＣｓ全能标志物ＮａｎｏＳ０Ｘ２０ｃｔ４ＣＤ１，但是无血清培养的ｈＵＣ，，ｇ，，ＥＡ－４的阳性率更高－ＭＳＣＳＳ；（３）无血清培养体系培养的ｈＵＣｓ与有血清培养的－ｈＵＣ－ｓ（４）ｈｕｅＭＳＣ均具有成脂成骨成软骨分化能力；两种培养体系培养的１北京协和医学院中国医学科学院硕±研巧生学位论文Ｍ