养殖半滑舌鳎无眼侧黑化机制的初步研究

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1、学校代码：10264研究生学号：M120101021上海海洋大学硕士学位论文题目：养殖半滑舌鳎无眼侧黑化机制的初步研究Preliminaryinvestigationonmechanismforblind-side英文题目：hypermelanosisoffarmedtonguesole专业：水产养殖研究方向：鲆鲽类无眼侧黑化分子机制研究姓名：史学营指导教师：柳学周研究员二O一五年四月六日养殖半滑舌鳎无眼侧黑化机制的初步研究Preliminaryinvestigationonmechanismforblind-sidehypermelanosisoffarme

2、dtonguesole学位论文完成日期：______________指导教师签字：______________答辩委员会成员签字：______________________________上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月

3、日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注答辩地点答辩时间上海海洋大学硕士学位论文养殖半滑舌鳎无眼侧黑化机制

4、的初步研究摘要本研究以我国鲆鲽类主导养殖品种—半滑舌鳎（CynoglossussemilaevisGünther）为研究对象，针对养殖鱼无眼侧黑化的表观现象，运用显微观察技术，研究了其皮肤黑色素细胞、黄色素细胞、虹彩细胞及鳞片的形态特征，探明了其数量分布与体色的关系；利用分子克隆技术克隆了黑化相关功能基因POMC，pMCH，MCHR，分析了其基因结构和多态特性，探究了它们在各个组织中的表达情况；采用实时荧光定量PCR方法研究了POMC，pMCH，MCHR在不同黑化程度实验鱼的脑垂体和皮肤中的表达变化规律，分析了体色相关基因表达调控与无眼侧黑化程度的关系。研究结

5、果可为半滑舌鳎无眼侧黑化的细胞与分子机制研究提供基础资料。主要研究结果如下：1.半滑舌鳎体表色素细胞形态、鳞片特征与黑化的关系半滑舌鳎色素细胞类型主要有3种：黑色素细胞、黄色素细胞和虹彩细胞。黑色素细胞较大，细胞直径10-60μm，细胞形状不规则，大体分为两种类型：一种树突状分枝不明显；另一种延伸成放射状。黄色素细胞较小，圆形或椭圆形，细胞直径1-5μm，视野下呈黄色。虹彩细胞较大，细胞直径10-70μm，分布较均匀，形状不规则，呈卵圆形、棒状或多边形等。半滑舌鳎无眼侧正常皮肤中未发现黑色素细胞分布，而无眼侧黑化皮肤黑色素细胞和虹彩细胞的分布数量显著低于有眼侧

6、正常皮肤（P＜0.05)。无眼侧正常皮肤中黄色素细胞和虹彩细胞数量与有眼侧正常皮肤和无眼侧黑化皮肤相比也较少。半滑舌鳎色素细胞主要在皮肤上分布（约占70%）。在无眼侧黑化的皮肤上，以延伸成放射状的黑色素细胞分布为主（占60%以上），而在有眼侧正常皮肤上，以树突状分枝不明显的黑色素细胞分布为主；在无眼侧黑化和有眼侧正常鳞片上，都是以的分枝不明显的黑色素细胞为主，且鳞片上的黑色素细胞分布相对稀疏。生活史中，半滑舌鳎无眼侧鳞片类型经历了栉鳞→弱栉鳞→圆鳞逐渐转变的过程，但无眼侧黑化区域的鳞片仍为栉鳞，在无眼侧黑化与正常皮肤交界处发现I上海海洋大学硕士学位论文了弱栉鳞

7、。无眼侧黑化鱼的体表两侧栉鳞的类型与形态特征相似，但有眼侧皮肤、无眼侧黑化皮肤和无眼侧正常皮肤的鳞片上硬棘数量不同，提示半滑舌鳎无眼侧黑化发生过程中鳞片形态及其调控机制也发生了明显变化。2.半滑舌鳎阿黑皮素原（POMC）的克隆和表达特性分析首次从半滑舌鳎垂体中获得了两种POMC亚型-POMC-a和POMC-bcDNA全长序列，全长分别为910bp和844bp，开放阅读框（ORF）分别为642bp和537bp，5’非编码区分别为113bp和87bp，3’非编码区分别为154bp和210bp。POMC-a和POMC-b分别编码213和178个氨基酸，除信号肽区域外

8、，其序列均编码促肾上腺皮质激素（ACT