基于普鲁兰多糖的纳米药物递送系统靶向抗肝癌作用研究

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1、分类号：R73-37学校代码：10062密级：学号：2012601025博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：基于普鲁兰多糖的纳米药物递送系统靶向抗肝癌作用研究TITLEInvestigationofpulluan-basednanoparticlesystemfordrugdeliveryagainsthepatma一级学科：临床医学二级学科：肿瘤学论文作者：刘媛媛指导教师：张宁教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R73-37学校代码：10062密级：学号：2012601025学位类别：科学学

2、位专业学位学科门类：医学博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：基于普鲁兰多糖的纳米药物递送系统靶向抗肝癌作用研究TITLEInvestigationofpulluan-basednanoparticlesystemfordrugdeliveryagainsthepatma一级学科：临床医学二级学科：肿瘤学论文作者：刘媛媛指导教师：张宁教授导师组成员：王银松副教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别

3、加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框

4、内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日天津医科大学博士学位论文中文摘要目的：原发性肝细胞癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）是世界上最常见的恶性肿瘤之一，且有逐年上升趋势。化疗是治疗肝癌的常用方法之一，然而大部分肝癌易对化疗药物产生多药耐药性，从而严重限制了其在临床上的应用。因此，探索有效的肝癌治疗策略意义重大。普鲁兰多糖是一种由出芽短梗霉发酵产生的水溶性多糖，具有许多优良的生物学性质，还是肝癌细胞表面去唾液酸糖蛋白受体（ASGPR）的天然配体，可以用作肝癌靶向载体材料。本研究构

5、建了两种基于普鲁兰多糖的肝癌靶向纳米共载体系，用于不同作用机制的抗肿瘤药物或基因与化疗药物的有效共载，以期联合多种治疗方法实现对肝癌的高效作用。研究方法：第一部分：合成pH敏感的普鲁兰多糖衍生物URPA；将抗肿瘤药物甲氨蝶呤（MTX）以酯键与URPA偶联，形成高分子前药MTX-URPA；采用红外1光谱（IR）与核磁共振氢谱（HNMR）对URPA与MTX-URPA进行化学结构表征。利用自组装技术制备MTX-URPA前药型纳米粒；将抗血管生成药物康普瑞汀（CA4）物理包埋于MTX-URPA纳米粒；采用透射电镜（TEM）观察纳米粒的形

6、貌；采用动态激光散射法检测其粒径；采用Zeta电位测定仪考察其表面荷电性质；采用紫外分光光度法（UV）考察纳米粒的载药能力。利用MTT法检测载药纳米粒对肝癌HepG2细胞的毒性，并通过流式细胞术检测其在细胞中的摄取量。构建裸鼠肝癌皮下移植瘤模型，采用高效液相色谱法（HPLC）考察尾静脉注射给药后荷瘤小鼠体内MTX与CA4的血药浓度与组织分布及其肿瘤生长情况与肿瘤组织中血管密度，综合评价该纳米共载体系的抗肿瘤活性。第二部分：通过迈克尔加成反应合成聚氨基酯PBAE。以绿色荧光蛋白质粒（pEGFP）为模型基因，制备PBAE/pEGFP

7、纳米复合物；采用琼脂糖凝胶电泳考察两者的复合情况，确定最佳PBAE/pEGFP质量比。将MTX通过酯键与1普鲁兰多糖偶联形成高分子前药MTX-PL，采用IR与HNMR技术对其进行化学结构表征，采用UV法检测前药分子中MTX的含量。将MTX-PL吸附包裹于PBAE/pEGFP纳米复合物的表面，形成亲水多糖外壳，制备纳米共载体系。采用TEM观察纳米体系的形貌；采用动态激光散射法检测其粒径与粒径分布；利用Zeta电位测定仪考察其表面荷电性质。采用激光共聚焦显微镜与流式细胞I天津医科大学博士学位论文术考察纳米共载体系对HepG2细胞的亲

8、和性以及pEGFP在细胞中的转染效率；采用CCK-8试剂盒检测纳米共载体系的细胞毒性；通过小动物活体成像技术观察纳米共载体系在HepG2荷瘤小鼠体内的分布，评价其对肝癌的靶向作用。结果：第一部分：成功合成了URPA，其中尿刊酰基取代度为5.2%。URPA具有显著