巴什拜羊及其杂交羊重组bpi蛋白的部分功能研究

《巴什拜羊及其杂交羊重组bpi蛋白的部分功能研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：学号：2012108035单位代码：10759石河子大学碩士#像猞忒巴什拜羊及其杂交羊重组BPI蛋白的部分功能研究学位申请人陈冬梅指导教师孙延鸣（教授）申请学位门类级别农学硕士学科、专业名称临床兽医学研究方向动物生殖调控与产科疾病所在学院动物科技学院中国•新疆•石河子2015年5月分类号：密级：学号：2012108035单位代码：10759石河子大学硕士学位论文巴什拜羊及其杂交羊重组BPI蛋白的部分功能研究学位申请人陈冬梅指导教师孙延鸣（教授）申请学位门类级别农学硕士学科、专业名称临床兽医学研究方向动

2、物生殖调控与产科疾病所在学院动物科技学院中国·新疆·石河子2015年5月StudyonFunctionofRecombinantBPIProteinofBashibaiSheepandItsHybridSheepADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofAgricultureByDongmei-chen（ClinicVeterinary）Disserta

3、tionSupervisor:Prof.SunYan-mingMay，2015ShiheziXinjiangChina本研究受国家自然科学基金资助项目---《BPI在盘羊、巴什拜羊及其杂交后代抗支原体肺炎的作用机理研究》（NO：31160525）资助。ThisresearchissurpportedbytheNationalNaturalScienceFoundationofChinanamedbyThemechanismstudyofBPIonArgali,Bashibaisheepandtheirhybr

4、idsheepresistingMycoplasmaovipneumoniae.(NO：31160525).石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名：时间：〇wr年6月^日使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论

5、文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。<权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名时间#&年汐月尸日导师签名：时间：年/月/曰摘要杀菌性/通透性增强蛋白（bactericidal/permeabilityincreasingprotein,BPI）是存在于人和哺乳动物多形核粒细胞内的一种阳离子抗菌蛋白，BPI蛋白能够特异性杀伤革兰氏阴性菌并中和内毒素，同时，具

6、有免疫调节、诱导内皮细胞凋亡、抗真菌、抗弓形虫感染等生物学功能。目的：本研究以新疆巴什拜羊及杂交羊(盘羊♂×巴什拜羊♀)为研究对象，应用分子生物学技术克隆BPIN-端序列，并在巴斯德毕赤酵母中表达出43KD的含有199个氨基酸的重组BPI蛋白(recombinantbectericidal/permeabilityincreasingprotein，rBPI)，利用Ni2+螯合亲和层析法纯化后通过抑菌试验、凋亡诱导试验、抑制支原体试验、比较巴什拜羊及杂交羊之间BPImRNA表达水平的差异，以揭示BPI蛋白的体

7、外生物学功能。方法：（1）巴什拜羊及其杂交羊BPI基因的克隆与真核表达：从巴什拜羊及其杂交羊外周血多形核粒细胞（Peripheralbloodpolymorphonuclearneutrophils，PMN）中提取总RNA，经RT-PCR扩增出BPIN端基因片段，将其克隆至pPIC9K载体中，构建真核表达质粒pPIC9K-BPI，经PCR、酶切及测序鉴定正确后，电转化至毕赤酵母GS115中，并用0.5%甲醇对重组菌株GS115/pPIC9K-BPI进行诱导表达，最后用SDS-PAGE鉴定rBPI的表达。（2）

8、巴什拜羊及杂交羊BPI基因表达产物的纯化：为了获得纯度较高的巴什拜羊及其杂交羊的rBPI，对巴什拜羊及其杂交羊rBPI采用Ni2+螯合亲和层析法进行纯化，再用SDS-PAGE对纯化产物进行检测。（3）巴什拜羊及杂交羊rBPI的抑菌作用：将巴什拜羊及杂交羊rBPI分别加入大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌中，利用微量肉汤稀释法检测巴什拜羊及杂交羊rBPI对三种致病菌的抑制作用。（4）巴什拜羊及杂交羊r