仿刺参（apostichopus japonicus）体腔液的抗菌特性

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1、分类号密级UDC编号硕士学位论文仿刺参（Apostichopusjaponicus）体腔液的抗菌特性丛聪（1213001）指导教师姓名周遵春研究员、闫喜武教授专业名称动物遗传育种与繁殖论文答辩日期2015年6月2日学位授予日期2015年7月ThisIsForTheDegreeOfMasterAntibacterialanalysisofcoelomicfluidfromtheseacucumber（Apostichopusjaponicus）Supervisor：ZunchunZhouMasterCandidate：C

2、ongCongCollegeofFisheriesandLifeScienceDalianOceanUniversity(AnimalGeneticBreedingandReproduction)Dalian,LiaoningProvince,P.R.ChinaⅡ摘要摘要仿刺参（Apostichopusjaponicus），又称刺参，属于棘皮动物门（Echinodemata），海参纲（Holothuroidea），楯手目（Aspidochirotidae），刺参科（Stichopodidae），仿刺参属（Apostic

3、hopus），是我国重要的水产养殖品种。为了解仿刺参体腔液的抗菌谱及不同二价金属离子对其体腔液抗菌活性的影响，实验采用生长曲线测定法来分别测定体腔液上清和体腔细胞破碎液上清对哈维氏弧菌（Vibrioharveyi）、灿烂弧菌（Vibriosplendidus）、希瓦氏菌（Shewanellabaltica）、假交替单胞菌（Pseudoalteromonasnigrifacien）、金黄色葡萄球菌（Staphyloccocusaureus）、溶壁微球菌（Micrococcuslysodeikticus）、停乳链球菌（St

4、reptococcusdysgadysgalactiae）、拟诺卡式菌（Nocardiopsissp.）等常见细菌生长的影响，并通过此法以溶壁微球菌为受试菌来测定海洋环境中常见的Mg2+、Mn2+、Ca2+、Fe2+、Zn2+、Cd2+对仿刺参体腔液上清抗菌活性的影响。结果表明，仿刺参体腔细胞破碎液上清对上述8株细菌的生长都无抑制作用，体腔液上清仅对溶壁微球菌的生长有显著的抑制作用，而对其余7株受试菌的生长没有显著影响；Mn2+和Zn2+能明显增强体腔液上清对溶壁微球菌生长的抑制作用，而Mg2+、Ca2+、Fe2+、C

5、d2+则对体腔液上清的抗菌活性没有明显影响。研究结果表明，仿刺参体腔液在体外状态下仅具有窄谱的抗菌活性，与抗菌相关的免疫因子则主要存在于体腔液上清中；体腔液中的免疫活性因子对海洋中常见的二价金属离子有一定的适应性，而且适当浓度的Mn2+和Zn2+也许具有能增强仿刺参抗菌应答能力的作用。为了进一步探索溶壁微球菌与其它不受仿刺参体腔液抑制的细菌之间、革兰氏阳性与革兰氏阴性细菌之间，以及不同种的细菌之间在引起仿刺参体腔液中免疫因子应答变化上是否有规律性的差异，将灿烂弧菌、哈维氏弧菌、假交替单胞菌、溶壁微球菌和停乳链球菌各自注

6、射仿刺参，然后分别采用对硝基苯基磷酸酯底物法、氯化硝基四氮唑蓝法、溶壁微球菌粉法和多巴络合物生成法对体腔液上清中的酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）、超氧化物歧化酶（SOD）、溶菌酶（LYZ）和酚氧化酶（PO）的活力进行了测定。结果表明：当灿烂弧菌刺激后，ACP和AKP活力显著升高，而SOD、LYZ和PO活力显著降低；当哈维氏弧菌刺激后，ACP、SOD、LYZ和PO活力显著升高，AKP活力变化不规律；当假交替单胞菌刺激后，ACP、LYZ和PO活力显著升高，SOD活力先升高后降低，AKP活力变化不规律；当溶壁微球

7、菌刺激后，ACP和PO活力显著升高，SOD活力先升高后降低，LYZ活力先升高后降低，而后在72h恢复至对照水平，AKP活力变化不规律；当停乳链球菌刺激后，除AKP活力在4h有所下降外，其余免疫相关酶活力均显著升高。研究结果表明，PO是仿刺参非特异性免疫系统中最高效、敏感的免疫因子之一；在诱导仿刺参免疫因子应答变化方面，革兰氏阴性细菌和革兰氏阳性细菌间没有明显的规律性差异；溶壁微球菌诱导LYZ的应答变化与灿烂弧菌、哈维氏弧菌、假交替单胞菌和停乳链球菌存在明Ⅰ显差异，LYZ可能是仿刺参清除入侵溶壁微球菌的主要免疫因子；灿烂

8、弧菌诱导仿刺参免疫因子应答变化显著不同于其他4株细菌，显示出本研究选取的5个免疫指标在预警灿烂弧菌病害上具有潜在应用价值；同样地，在仿刺参中，停乳链球菌也具有作为免疫增强剂的潜在应用价值。关键词：仿刺参；体腔液；抗菌活性；细菌；金属离子ⅡAbstractAbstractApostichopusjaponicusbelongstoE