中国大豆主栽品种遗传转化基因型的筛选

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1、硕:tr学沄沦文中国大豆主栽品种遗传转化基因型的筛选CandidateGenotypesScreenedfromChineseSoybeanEliteCultivarsforTransformation一级学科：生物学二级学科：遗传学研宄生：陈普指导教师：东方阳教授侯文胜研究员河北科技师范学院2015年6月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研宄成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研宄成果，也不包含为获得河北科技师范学院或其他教育机构的学位或证书而使

2、用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名:签字日期：y[^年6月[v日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解河北科技师范学院有关保留、使用学位论文的规定。特授权河北科技师范学院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。(保密的学位论文在解密后适用本授权说明）签字曰期丨t年6月签字曰期:年彡月缩略词英文缩写英文全称中文名称PCRPoly

3、meraseChainReaction聚合酶链反应ODOpticalDensity光密度RPMRevolutionsPerMinute每分钟转速DEPCDiethypyrocarbonate焦碳酸二乙酯GUSβ-Glucuronidaseβ-葡糖苷酸酶BarBiolaphosResistance双丙氨酰磷抗性基因PTXDPhosphiteOxidoreductase亚磷酸盐氧化还原酶I摘要大豆作为重要的植物油脂和蛋白质来源，在人类膳食中扮演着重要的角色。近年来，随着种植面积的增加，商品化的转基因大豆正占有越来越多的大豆交易市场

4、。受体基因型依赖是限制根癌农杆菌介导的大豆遗传转化效率提高的重要因素。目前，主栽大豆品种遗传转化效率偏低，严重制约优良转基因材料的创制和品种选育效率。本实验以适宜我国不同地域种植的13个大豆主要栽培品种为材料，系统比较了其再生能力和根癌农杆菌侵染转化效率。分析了不同品种之间丛生芽诱导率与芽伸长率之间的关系。研究结果表明，不同品种间的再生能力和转化效率均存在显著差异，但农杆菌侵染对各品种丛生芽诱导率的影响较小。在进行根癌农杆菌侵染后，经过筛选剂筛选，各品种的芽伸长率表现出明显差异，从而影响到其转化效率。研究中优选到4个转化效率较

5、高的中国主栽大豆品种，中黄42和中黄39适宜于黄淮海等我国中部地区种植，桂夏3号适宜于在南方大豆区种植，疆莫豆1号适宜于东北地区，其中高蛋白品种“中黄42”的转化效率可达4.07%，为优良转基因大豆材料的创制提供了更为理想的受体材料。目前，在转化过程中为了便于筛选阳性转化植株，通常会使用筛选标记基因。然而，由此所带来的一些可能存在的潜在风险，引起了比较大的争议。由于植物缺乏利用亚磷酸盐的基因，所以植物不能利用亚磷酸盐。本研究利用亚磷酸盐脱氢酶基因（ptxD）和亚磷酸盐组成的筛选系统，用于农杆菌介导的大豆转化实验中阳性植株的筛选

6、。结果表明，此筛选系统虽然具有一定的筛选效果，但是筛选效率较低，并不能很好的将阳性植株与非阳性植株区分开来，所以该筛选系统并不适合大豆的遗传转化。关键字：大豆品种；根癌农杆菌；转化效率；亚磷酸盐脱氢酶IIABSTRACTSoybeanisamajorsourceofplantforedibleoilandprotein,playsanimportantroleinthehumandiet.Inrecentyears,withplantingareaincreaseofgeneticallymodifiedsoybean,the

7、yareoccupyingmoreandmoresoybeanmarket.Agrobacteriumtumefaciens-mediatedtransformationofsoybeanishighlygenotype-dependent.Sincetheelitesoybeancultivarsweretransformedreluctantly,itlimitedtobreedthenewtransgenicvarieties.Inourresearch,13elitesoybeancultivarswereusedin

8、thecomparisonofregenerationandinfectionefficiencyduringtheirtransformation,aswellasintheanalysisoftherelationshipbetweenratesofshootinduci