牡丹花衰老相关基因的筛选与功能研究

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1、＠满？考博ｉ学位论文牡丹花衰老相关基因的筛选与功能研究研究生姓名刘荐英指导教师卢向阳教授＿＿学科专业化物化学分广化物学‘研究方向怕物发台化物学分ｆ生物学—－：〇五年分类号％％．ｌｌ密级公开ＵＤＣ６３５单位代码１０５３７顯南祭巫丈＃尊±学位论文牡丹花衰老相关基因的筛选与功能研究ＳｃｒｅｅｎｉｎａｎｄＲｅｓｅａｒｃｈｏｆＧｅｎｅｓＡｓｓｏｃｉａｔｅｄｇｗｉｔｈｔｈｅＦｌｏｗｅｒＳｅｎｅｓｃｅｎｃｅｉｎＴｒｅｅＰｅｏｎｙＰ＇ａｅｏｎｉａｓｕｎｉｔｉｃｏｓ

2、ａＡｈＡｙ．（斯）硏究生姓名刘春英指导教师卢向阳教授郑国生教授学科专业生物化学与分子生物学硏究方向植物发育生物学与分子生物学论文答辩日期２０１５年月日答辩委员会主席膝信波论文评阅人杨洪强徐吉臣周立刚王贤纯范燕萍二〇—五年四月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在指导老师指导下进行的研巧工作及取得的研究。尽我所知ｉ成果，除了文中特别加＾ｌ，论＾标注和致谢的地方外文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖南农业大学或其它教育机构的学位或化一书而使用过的材料。与我巧工作的同志对

3、本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间；年＜＾月作／关于论文使用授权的说明、本人完全了解湖南农业大学有关保留使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和电子稿，允许论文被查阅和借阅，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意湖南农业大学可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容，并同意将由此产生的收益捐赠给学校教育基金会用于发展研巧生教育。（保密的学位论文在解密后应遵守此协巧）研究生签名：时间：年＾月石导师签名：时间：己ｗ；Ｔ年

4、＾月曰ｄｆｉ摘要—摘要Ｐｆｌ＇’牡丹ＣｅｏｎｚａｓＭ方ｈ／ｎｃｏｓａＡｎｄｒ．）是我国的十大名花之首，是美好、幸福、吉祥、富贵的象征－５，深受世界各国人民的喜爱。牡丹的正常花期在每年４月份，尽管现在己通过牡丹春节催花技术实现了人们春节赏花的愿望，但由于牡丹的自然花期比较短，一般仅为７天左右，因此仍不能满足人们赏花的愿望。牡丹的花期长短，直接影响到牡丹的观赏质量和牡丹产区的经济效益，延长牡丹花期对促进旅游。延缓牡丹花衰老业的发展具有积极意义一，已成为当前急需解决的重要课题之。＇＇本研究Ｗ牡丹鲁荷红为试

5、验材料，通过观察自然条件下牡丹花衰老过程中形态、显微结构的变化，确定了牡丹花的衰老时期。利用抑制性消减杂交技术，构建了牡丹花衰老相关基因的抑制消减杂交文库。通过ＲＡＣＥ扩增得到３个牡丹花衰老相关ｃＤＮＡＩ１１－４公骑的超表达基因的全长，并对其进行生物信息学分析Ｂ２ＡＭ。构建了Ｐ，利用花序侵染法转化野生型拟南芥，观察转基因拟南芥的表型特征载体。其主要研究结果如下：１．通过对自然条件下牡丹花衰老过程中花的外形和石蜡组织切片的观察，发现花一瓣的组织结构变化趋势和花发育不同时期的形态学变化趋势基本致，并最终确定牡丹花的衰老时期。

6、２．分别盛开花瓣和衰老花瓣作为化ｓｔｅｒ（ｄｒｉｖｅｒ）和ｄｒｉｖｅｒ（ｔｅｓｔｅｒ），构建杜丹花衰老相关的正向和反向抑制消减杂交文库，最终分离得到２１１个有效表达序列标签（ＥＳＴ）序列。根据ＫＥＧＧ数据库的ＢＬＡＳＴ结果，有４８个ＥＳＴ序列得到功能注释。将所得２１１条ＥＳＴ使用ＣＯＧ数据库进行直系同源聚类分析，发现其中４４条ＥＳＴ序列被分成１４类：未知功能预测，；碳水化合物转运和代谢；蛋白质周转翻译后修饰和分子伴侣翻译，核糖体结构和生物转化脂质转运和代谢无机离子转运和代谢细；；；；胞骨架；转录；细胞壁和细胞膜的生物合成；

7、胞内运输，分泌和囊泡转运；防御机制；氨基酸转运与代谢次生代谢物的合成，转运和分解代谢复制，重组和修复。为进；；一，从２１步分析差异表达基因在不同花衰老时期的表达情况１条ＥＳＴ序列中随机选取－ＰＣＲ分析－２３条ＥＳＴ进行ｑＲＴ，结果表明，ｑＲＴＰＣ民结果与花衰老相关的抑制消减杂交结果相一致。３．根据消减文库中获得的长链脂醜辅酶Ａ基因的ＥＳＴ序列设计引物，利用ＲＡＣＥ扩增得到２３７７ｂｐ的全长ｃＤＮＡ，其中包含１８３０ｂｐ的编码区，共编码６０９个氨基酸，分子量为６７，．９４ＫＤ等电点为６．１９１。ＰｓＬＡＣＳ包括３０个可能的

8、稱酸化位点，Ｉ湖南农业大学博±学位论文－这可能与酶活性的调节有