有机磷降解菌生物学特性及降解酶酶学性质分析

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1、分类号：Q936单位代码：10193密级：公开学号：2012197硕士学位论文有机磷降解菌生物学特性及降解酶酶学性质分析Biologicalcharacteristicsoforganophosphatedegradingbacteriaandenzymologypropertiesanalysisoforganophosphatedegradationenzyme作者姓名：于亭学位类别：理学硕士专业名称：生物化学与分子生物学研究方向：生物大分子的结构与功能指导教师：杨美英副教授所在学院：生命科学学院2015年5月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文

2、是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并

3、同意将本论文的版权授权给吉林农业大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日摘要磷是植物生长发育过程中不可或缺的元素，但在田间多以无效的结合态的磷存在

4、。土壤中的微生物不仅能够将无效态的磷转化为游离态的有效磷，还可以降解田间残留的农药。分离土壤中的解磷菌并加以利用，便可以充分利用土壤中的难溶性磷，创造更大的收益和经济效益。本实验从大豆根际土壤中分离纯化出了三种既能降解大豆卵磷脂又能降解乐果的有机磷降解菌Yj1、Yj2和Yj3，并对这三种菌进行了鉴定、生长条件优化、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和有机磷降解酶的酶活性测定以及有机磷降解酶的分离纯化。通过对有机磷降解菌生物学特性及有机磷降解酶酶学性质的研究，一方面可以提高自然界中磷素利用率、减少有机磷农药在环境中的残留，同时为提高有机磷降解率提供基础理论依据。另一方

5、面，也为降解有机农药和生产有机磷降解菌剂奠定基础。经vitek2自动分析系统鉴定，Yj1为灵杆菌同粘质沙雷氏菌（Serratiamarcescens）且与SerratiamarcescensWW4（CP003959.1）的16srDNA相似度为99%。正交试验对所需培养基进行优化，得到该菌株的最佳生长条件为甘露糖、蛋白胨和pH=8的组合。Yj1菌株在两种磷源条件下，菌株生长量均很低，但72h内以大豆卵磷脂为磷源时的菌体生长情况优于乐果。以大豆卵磷脂为磷源时酸性磷酸酶、碱性磷酸酶与有机磷降解酶活性明显高于以乐果为磷源时的酶活，且72h内碱性磷酸酶活性一直都

6、高于酸性磷酸酶和有机磷降解酶。硫酸铵沉淀法结合阳离子交换层析成功从Yj1菌体中分离纯化了有机磷降解酶，SDS-PAGE结果显示纯化的蛋白为单一条带。且阳离子交换层析的提纯倍数是硫酸氨沉淀的5.303倍，硫酸氨沉淀为粗酶的1.416倍。Yj2鉴定为醋酸钙不动杆菌，与Acinetobactergenomosp.13（FJ694759.1）的16srDNA相似度为99%。正交试验对所需培养基进行优化，得到该菌株的最佳生长条件为葡萄糖、硫酸铵和pH=8的组合。Yj2菌株在两种磷源条件下，72h内以乐果为磷源时的菌体生长情况优于大豆卵磷脂。以大豆卵磷脂为磷源时酸性

7、磷酸酶、碱性磷酸酶活性高于以乐果为磷源时的酶活，而有机磷降解酶活性却是以乐果为磷源时高于大豆卵磷脂。且72h内酸性磷酸酶活性一直都高于碱性磷酸酶和有机磷降解酶。硫酸铵沉淀法结合阳离子交换层析成功从Yj2菌体中分离纯化了有机磷降解酶，SDS-PAGE结果显示纯化的蛋白为单一条带。且阳离子交换层析的提纯倍数是硫酸氨沉淀的10.44倍，硫酸氨沉淀为粗酶的1.327倍。Yj3鉴定为芽孢杆菌（Bacillus），与Bacillussp.B2101（JX266369.1）的16srDNA相似度为99%。正交试验对所需培养基进行优化，得到该菌株的最佳生长条件为葡萄糖、

8、蛋白胨和pH=9的组合。Yj3菌株在两种磷源条件下，72h内以大豆卵磷脂为磷源时