西瓜食酸菌抗铜性相关基因cusb的功能分析

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2、：■＂专业名称生物化学与分子生物学＇研究方向分子生物学所在学院农学院、？－．Ｉ．‘批．‘＇’尸；？ｆ＇，）少＾新疆？乌鲁木齐；？－—公／－二〇五年六月■？二，＇Ｖ：？■－．．每．进，．＇轉．六独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加标法和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得新疆农业大一学或其他教育单位的学位或证书而使用过的材料。与我同王作的。同志对本研究所做的任何贡献

3、均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意＇研究生签名；时间；Ｚｏｉｒ年＾月／日／关于学位论文使用授权的说明疆农业本人完全了解新疆农业大学有关保留、使用学位论文的规定，目Ｐ：新大学有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子文档，可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，允许论文入被查阅和借阅。本人授权新疆农业大学将学位论文的全部或部分内容编有关数据库进行检索，可Ｗ公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。’（保密的学位论文在解密后应遵守此协议）＂＜王年研究生签名；去－Ｃ时间；＞月日导师签名：时间：年月日＾．Ｉ本文是新疆维吾尔自

4、治区自然科学基金项目“细菌性果斑病菌（Acidovoraxcitrulli）抗铜基因的筛选与抗铜机制研究”的部分研究成果（项目编号：2015211A020）课题主持人：刘君副教授（新疆农业大学）西瓜食酸菌抗铜性相关基因cusB的功能分析摘要西瓜食酸菌（Acidovoraxcitrulli）侵染葫芦科植物会使其产生一种破坏力极大的瓜类细菌性果斑病（bacterialfruitblotch，BFB），该病害已在世界各国迅速传播，对当地的西甜瓜产业造成严重的经济损失。目前铜素类杀菌剂广泛应用于防治瓜类细菌性果斑病，但过度使用，使得西瓜食酸菌抗铜能力逐渐增强，因此，研究该病菌的抗铜机理显得尤为突出

5、。本研究首先对西瓜食酸菌RND（耐药结节细胞分化）家族外排转运体的膜融合蛋白基因cusB进行生物信息学分析，然后利用实验室保存的cusB基因缺失的突变体△cusB，通过比较野生型和突变体以及功能互补菌株在抗铜性、胞外分泌物检测、致病性及过敏性坏死反应等相关的生物学性状之间的差异分析，研究cusB基因的功能，主要获得以下结论：首先，cusB基因的生物信息学分析，cusB基因大小为1185bp，编码具有394个氨基酸残基的CusB蛋白亚基，主要作为一个转运体参与RND外排转运体的正常工作，西瓜食酸菌的CusB蛋白与大肠杆菌的CusB蛋白在理化性质以及亲缘关系上较近，预测该蛋白在1-30氨基酸残

6、基处疏水性较高，且存在一个跨膜结构域，预测发现存在多个磷酸化位点，分泌蛋白的亚细胞定位于周质空间，其二级结构存在α-螺旋、β-折叠、无规则卷曲。其次，cusB基因缺失突变体与野生型和功能互补菌株表型测定比较本研究利用双亲杂交的方法构建功能互补菌株，与野生型相比，突变体在抗铜性，胞外多糖分泌，生物膜形成中显著降低，而在功能互补菌株中这些差异明显减小，表明西瓜食酸菌的cusB基因与这3种表型联系紧密，但cusB基因的缺失没有影响致病性及过敏性坏死反应、胞外纤维素酶的分泌、胞外蛋白酶的分泌，表明该基因与这3种表型关系不密切。关键词：西瓜食酸菌，RND家族外排转运体，cusB基因，生物信息学分析，

7、表型检测IFunctionalAnalysisofCopperResistanceRelatedGenecusBinAcidovoraxcitrulliAbstractAcidovoraxcitrullihaveinfectedonplantsofthefamilycucurbitaceae,itwillresultinadevastatingmelonbacterialfruitblotch（BFB）,thedisea