苯醚甲环唑对斑马鱼毒性及作用机制研究

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1、分类号：单位代码：密级：公开学号：博士学位论文苯醚甲环唑对斑马鱼毒性及作用机制研究研究生：穆希岩指导教师：李学锋合作指导教师：王成菊申请学位门类级别：理学博士专业名称：农药学研究方向：农药毒理与使用技术原理所在学院：理学院年月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研宄成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研宄所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研宂生签名乡得时间年月？曰关于论文使

2、用授权的说明本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。保密的学位论文在解密后应遵守此协议）研究生签名肴之时间：年月？日导师签名铃巧时间：年月曰中国农业大学博上学位论文摘要摘要随着人们对农药的环境负面作用认识的提高农药环境安全性评价工作己成为农药科学合理施用的基础。鱼类作为生态系统中的重要生物，同时又是人类的主要食物，农药对鱼类的毒性评价工作一直是农药环境评价的重点。三唑类农药

3、是目前使用量很大的一类杀菌剂苯醚甲环唑作为一种有代表性的三唑类杀菌剂，被广泛应用于各类农作物病害的防治。在中国，苯魅甲环唑更是防治水稻病害的主要农药。因此评价其对水生生物的毒性非常重要。本论文结合形态学、生物化学和分子生物学手段，研宄苯醚甲环挫对不同生命阶段斑马鱼的毒性及作用机制：苯醚甲环唑对斑马鱼急性毒性苯醚甲环哩对斑马鱼成鱼、胚胎和仔鱼的值分别为、和。该结果表明，斑马鱼不同生命阶段对苯醚甲环唑的敏感性顺序为：仔鱼成鱼胚胎。苯醚甲环挫对斑马鱼胚胎发育影响将斑马鱼胚胎分别暴露于、、、、、的苯醚甲环唑水溶液中。天发育试验结果表明，苯醚甲环唑能够在斑马鱼胚胎发育过程中引起一系列的不

4、良影响，包括孵化抑制、心率下降、自主运动异常、生长抑制以及多种致畸作用。为进一步探究苯醚甲环唑引起胚胎发育异常的机制，使用焚光定量法检测暴露于和苯醚甲环唑后，斑马鱼胚胎中与发育相关的个基因的表达量变化。结果发现处理后，斑马鱼胚胎、、和这四个基因表达水平显著下降，而和表达显著上调。苯醚甲环唑对斑马鱼抗氧化系统的影响分别将斑马鱼成鱼和胚胎暴露于、和的苯醚甲环唑溶液中，暴露持续天。分别在暴露后第和天时，测定成鱼肝脏和胚胎中三种抗氧化酶的活性以及编码这三种酶的基因表达量。另外，使用硫代磷酸巴比妥酸法测定含量，以检测苯醚甲环唑造成的氧化损伤。酶活性与基因表达结果表明，苯醚甲环唑处理后斑马

5、鱼成鱼肝脏和胚胎中、和的活性显著下降，同时伴随着这些酶的编码基因表达水平显著下调，而成鱼肝脏中的抗氧化因子被抑制程度要高于胚胎。含量测定结果发现斑马鱼成鱼肝脏暴露后出现了明显的脂质过氧化，而在胚胎中并未发现含量显著变化。苯醚甲环哩对斑马鱼脂类含量的影响中国农业大学博士学位论义摘要将斑马鱼胚胎和成鱼暴露于、和的苯醚甲环唑水溶液中。分别在暴露后第和天时测定处理后成鱼肝脏和胚胎中胆固醇、廿油三酯的含量以及与脂类合成和代谢相关的个基因的表达情况。生化试验结果表明试验浓度下苯酸甲环唑不能明显影响斑马鱼胚胎和成鱼肝脏中的胆固醇和甘油三酯含量。荧光定量结果表明，苯醚甲环唑处理天后成鱼和胚胎中

6、脂类相关的基因表达水平均出现显著变化。胚胎中和表达上调，、、紐和表达下调；而成鱼肝脏中这六种基因均表现出显著下调。苯醚甲环唑长期暴露对斑马鱼成鱼胆固醇含量影响将不同性别的成年斑马鱼分开长期（天）暴露于、和的苯醚甲环唑水溶液中。分别在暴露后、和天时检测肝脏中胆固醇含量以及与胆固醇合成代谢相关的个基因的表达水平。生化试验结果表明，雄性斑马鱼在苯醚甲环唑暴露天后肝脏中的胆固醇含量显著下降，而该影响在时进一步加强。而雌性斑马鱼肝胆固醇含量在整个暴露期间没有显著变化。此外，雌雄斑马鱼在苯醚甲环唑处理后体重均显著下降，但是雄性个体的下降程度要明显高于雌性个体。上述结果表明，雌性斑马鱼对苯醚

7、甲环唑表现出更强的耐受能力。基因表达结果进一步发现斑马鱼雄鱼在暴露后天和天时，肝脏中胆固醇合成基因八、、、、表达均显著下降。而雎鱼肝脏中这种基因虽然在暴露后第天时显著下调，但是随着暴露时间延长，其下调作用逐渐减弱，在暴露天时】、、和较对照组表现出上调。关键词：苯醚甲环唑，斑马鱼，胚胎发育，氧化应激，脂类含量，胆固醇中国农业大学博士学位论文，，，，，，，中国农业大学博上学位论文，，，中国农业大学博士学位论文目录目录第一章绪论农药对环境的负面影响农药的环境风险评价农药对水生态环境的影响农药对水生