花椒dna提取方法及条形码鉴定研究

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2、．．．＞？－专业名称野生动植物保护与利用？＊’研巧方向野生植物种质资源保护与开发利用、？■；＇．？Ｖ？－１；＇■■、—＇‘／Ｖ，：／．．，？＇Ａ，＇？．，义？．－■．＂？■义．Ｖ＊兴２０１５年５月ｌｙ＇主作．＇＊ｆｔ＇乂户Ｖ．／气与■？．＾＊：＇．ｙ，：．？／ＣｌａｓｓＮｕｍｂｅｒ．Ｕｔ：Ｓ５６５９ＳｉｄｅｎＮｕｍｂｅｒ：Ｓ２０１２４１０５Ｓｉｃｈｕａ打ｉＶｇｒｉｃｕｌ

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4、注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研巧成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料一同工作的同志对本研究所。与我做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。一研巧生签名：余瓜著又？Ｋ年（月日关于论文使用授巧的声明、本人完全了解四川农业大学有关保留使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借。阅，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文同意四川农业大学可Ｗ用不同方式在不同媒体上发

5、表、传播学位论文的全部或部分内容。。口＾论文不保密。□本论文保密，在＿年解密后适用本授权＂＂（请在上□内划Ｖ）研究生签名；在年ｆ月导师签名；＾作年＜＾日＞＞２＾摘要芸香科（ｉ？Ｗｆｌｃｅａｅ）花椒属（ＺａＷＡｏ加Ｍ）植物在我国有３９种巧，目前对其区一分主要形态鉴定为主。ＤＮＡ条形码鉴定是种新型的物种鉴定方法，是利用基因组中一段相对较短的片段对物种进巧鉴定的分子技术。本实验探究对花椒属植物不同材料样本ＤＮＡ提取方法的优化，使用ＤＮＡ条形码鉴定方法对花椒属９种Ｓ２植物共１２１份样本使用ＩＴ序列进行鉴定研究，旨在使

6、用分子鉴定的手段准确地对花椒属植物进斤鉴定，并尝试使用ＩＴＳ２序列对花椒（Ｚ执ｗｇｅａ／ｗｗ）及竹叶花椒（Ｚｗｗａｆｗｎ）种内的不同品种进行鉴定。主要研巧内容及结果如下：（１）使用在ＤＮＡ提取中较为常见的两种方法ＣＴＡＢ法及试剂盒法，对本次实验采集的花椒属１２１份样本进行提取与改良，结果表明，两种方法对新鲜叶片及经过珪胶干燥叶片林料的ＤＮＡ提取均能获得成功，果皮类材料经过改良提取３比，也能成功方法：在加入ＤＮＡ提取液么前，使用核分离液洗涂次，水浴时间提取ＤＮＡ。两种方法均能获得符合ＰＣＲ要求的总ＤＮＡ。ＰＣＲ后电泳检测

7、条带明一、亮、单，其样本经测序序列拼接及注释剪切后巧获得１２１条ＩＴＳ２序列。（２）使用打Ｓ２片段对花椒属植物进行鉴定，结果表明ＩＴＳ２序列能够有效鉴定本次实验收集的花椒属９种植物，除花粮讫筑併£６０？？／？１｜＾＾外，８种植物的种內最大Ｋ２Ｐ距离均小于与其余物种间的种间最小Ｋ２Ｐ距离，可Ｗ明显与其余物种进行区分。各物种在ＩＴＳ２序列中有稳定区别于其他８个物种的位点，可作为鉴别花椒属９种植物的辅助手段，能将花椒属９种植物进行良好地区分。邻接（ＮＪ）法构一建的系统聚类树，各物种均能各自聚为支，能较好地与其他物种较好地区分开。

8、Ｇ）在使用打Ｓ２序列对花椒及竹叶花椒的品种进行鉴定时，花椒种内４ＴＳ２一ＩＴＳ２个品种中，汉源花