a20在肝纤维化中的表达及其作用机制研究

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1、A20在肝纤维化中的表达及其作用机制研究关键词：TNFAIP3(A20),肝纤维化，BDL，DDC，MCD，炎症，LX-2细胞研究生姓名：王晓晗学号：1127219291学科专业：内科学（消化系病）指导教师：范竹萍教授导师组成员：邱德凯教授李海教授曹勤教授研究方向：脂肪性肝病的防治申请学位级别：硕士学位培养单位：上海交通大学医学院附属仁济医院上海市消化疾病研究所论文提交时间：2015年4月ITHEEXPRESSIONOFA20ANDITSFUNCTIONINLIVERFIBROSISKeywords：TNFAIP3(A20),liver

2、fibrosis,BDL，DDC，MCD，inflammation,LX-2cellsNameofpostgraduateWangXiao-hanStudentIDNo.1127219291DisciplinespecialtyInternalmedicine(Digestivesystemdiseases)TutorProfessorFanZhu-pingSupervisorgroupProfessorQiuDe-kaiProfessorLiHaiProfessorCaoQinResearchdirectionPreventionan

3、dtreatmentoffattyliverdiseasesAcademicdegreeapplicationMasterdegreeTheeducatingunitRenjihospital,ShanghaiJiaotongUniversitySchoolofMedicineShanghaiInstituteofDigestiveDiseaseTimeofthesissubmitted2015.4II上海交通大学医学院硕士论文III上海交通大学医学院硕士论文IV上海交通大学医学院硕士论文A20在肝纤维化中的表达及其作用机制研究摘要第一

4、部分A20在肝硬化患者肝脏组织中表达增加目的：探讨肝硬化肝脏组织标本中A20蛋白表达有无变化。方法：取临床诊断为肝硬化病人的肝脏组织（n=7）和正常对照组（n=4），免疫组化检测两组中蛋白A20的表达水平。结果：A20在人肝纤维化的肝脏中表达增高（P＜0.01），其中，肝星状细胞细胞和肝细胞为阳性。结论：A20在肝硬化患者的肝脏组织中表达增加。第二部分A20在小鼠肝纤维化模型肝脏组织中表达增加目的：探讨小鼠肝纤维化模型中肝脏组织中A20水平表达有无变化。方法：通过DDC饮食、MCD饮食及胆总管结扎（BDL）手术构建小鼠肝脏纤维化模型，通

5、过免疫印迹法及PCR分别检测3种模型中肝脏组织A20表达水平。结果：在3种小鼠肝纤维化模型中，A20在蛋白水平及mRNA水平表达均增高，MCD饮食喂养处理、DDC饮食喂养处理及行BDL手术及的小鼠mRNA水平实验组对照组分别升高约1.5倍、4.7倍、17.7倍。结论：A20在小鼠肝纤维化模型的肝脏组织中表达增加。第三部分A20在内毒素诱导的体外肝纤维化模型中的变化目的：探讨A20在内毒素（LPS）诱导的LX-2细胞体外肝纤维化模型中的变化I上海交通大学医学院硕士论文及其作用机制。方法:用不同浓度LPS（0,0.001,0.01,0.1,

6、1μg/mL）刺激LX-2细胞6小时以及用0.1μg/mL的内毒素（LPS）刺激LX-2细胞不同时间（0、6、12、24小时），免疫印迹法及PCR检测A20蛋白表达水平，PCR检测不同炎症因子(IL-6,MCP-1和TGF-β)的mRNA水平。结果：A20蛋白水平可随着LPS刺激LX-2细胞的浓度不同及刺激时间不同而发生变化。随着LPS刺激LX-2细胞时间延长，TLR4、IL-6,MCP-1和TGF-βmRNA水平增加。结论：使用LPS刺激LX-2细胞的不同条件下，A20的表达量具有浓度依赖性并随刺激时间变化而变化；并且炎症因子的表达量

7、随刺激时间的延长而升高。第四部分过表达A20可改善LX-2细胞体外肝纤维化模型中的纤维化程度及抑制炎症因子目的：探讨过表达A20对LX-2细胞体外肝纤维化模型的影响及其作用机制。方法：通过A20过表达腺病毒感染LX-2细胞，用0.1μg/mLLPS刺激LX-2细胞24小时后，进行免疫印迹检测α-SMA蛋白的变化，通过PCR检测TLR4、IL-6、MCP-1、TGF-β及α-SMA、col-1、col-3的变化。结果：过表达A20后，LX-2中α-SMA蛋白表达量明显降低，实验组α-SMA、col-1、col-3的mRNA水平较NC组均降

8、低，分别为0.44、0.47、0.67。TLR4及IL-6,MCP-1和TGF-β水平降低，分别为对照组的0.55、0.53、0.41、0.42。结论：A20可以抑制LX-2细胞中α-SMA及col-1、c