5’-aza-cdr对raji裸鼠移植瘤的抑制作用及对瘤细胞chfr表达和甲基化的影响

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1、分类号：R733密级：UDC：610学校代码：11065硕士学位论文5’-Aza-CdR对Raji裸鼠移植瘤的抑制作用及对瘤细胞CHFR表达和甲基化的影响张敏指导教师宋爱琴副教授学科专业名称儿科学（儿内科）论文答辩日期2015年5月31日5’-Aza-CdR对Raji裸鼠移植瘤的抑制作用及对瘤细胞CHFR表达和甲基化的影响摘要目的探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5’-Aza-CdR)对人伯基特淋巴瘤Raji裸鼠移植瘤生长的抑制作用，以及对肿瘤组织中CHFR基因表达和甲基化状态的影响。方法①采用细胞接种皮下成瘤的方法，将Raji细胞悬液以3×710/20

2、0ul的活细胞浓度接种于4-6周龄雄性裸鼠的右侧腋下，共接种18只裸鼠，构建荷瘤裸鼠模型。肿瘤短径大于0.40cm大小时，提示建模成功。②建模成功后，18只裸鼠随机分为实验组和对照组。实验组荷瘤裸鼠腹腔内注射5’-Aza-CdR（1ug/g），对照组给予腹腔内注射等体积的生理盐水。每2天注射1次，每3天测量肿瘤长短径，共24天。计算肿瘤体积大小，绘制肿瘤生长曲线。第24天，处死所有裸鼠，解剖移植瘤，比较两组移植瘤体积大小和重量。③从移植瘤组织中提取DNA，应用甲基化特异性聚合酶链反应方法（MSP）检测两组移植瘤组织CHFR基因甲基化。④从移植瘤组织中

3、提取RNA，应用实时荧光定量PCR方法检测移植瘤组织中CHFRmRNA的表达情况。结果①Raji细胞皮下接种1周时，肉眼可观察到局部小米粒大小的结节，2周时移植瘤短径大于0.40cm。此时实验组移植瘤体积是33(44.11±4.01)mm，对照组移植瘤体积是(47.11±2.71)mm，两组体积大小比较,差异无显著性（p＞0.05）。②观察至给药后第7天，实验组的移植瘤体积小于对照组，从绘制的移植瘤曲线上也可观察到两组移植瘤体积的差异逐渐增大，实验组中的移植瘤生长缓慢。24天观察结束时，实验33组的移植瘤体积为（290.11±23.86）mm，对照组

4、是（674.56±25.25）mm，实验组的移植瘤体积与对照组相比明显缩小，差异有显著性（p＜0.01）。③24天时，实验组移植瘤重量(762.00±87.87)mg，对照组是(1058.00±104.62)mg,实验组移植瘤重量与对照组相比明显减小，差异有显著性（p＜0.01），同时计算抑瘤率为27.98%。④实验组中的甲基化条带与对照组相比明显变暗，同时出现非甲基化条带，对照组中CHFR基因启动子只有甲基化条带被扩增。⑤与对照组（1.04±0.30）相比，实验组移植瘤组织中CHFRmRNA的表达水平（3.69±1.20）明显升高，差异有显著性（t

5、=3.94，P=0.001）。结论5’-Aza-CdR可抑制裸鼠人伯基特淋巴瘤的体内生长，诱导移植瘤组织CHFRmRNA表达增加。其机制可能为5’-Aza-CdR使甲基化的CHFR启动子发生去甲基化，使CHFR基因重新激活而表达增加，从而发挥其抑癌基因功能，起到抑制细胞增殖的作用，为恶性淋巴瘤的去甲基化基因靶向治疗提供了理论和实验依据。硕士研究生：张敏(儿科学)指导导师：宋爱琴副教授关键词：淋巴瘤；Raji细胞；CHFR基因；5-氮杂-2’-脱氧胞苷；DNA甲基化5’-Aza-CdRinducedinhibitionofCHFRexpressiona

6、nditsinhibitoryeffectonmethylationstatusinRajicellsinvivoandonthegrowthofxenograftedinnudemiceAbstractObjectiveTodeterminetheinhibitoryeffectof5’-Aza-CdRonthegrowthofBurkittLymphoma’sxenograftsinnudemice,toobserveitseffectonCHFRgeneexpressionandmethylationinthexenografts,andtoe

7、xplorethepossiblemechanisms.7Methods①Rajicellsuspensionofthelivecellconcentrationabout3×10/200ulwereinoculatedsubcutaneouslyintherightarmpitof18malenudemiceabout4-6weekold，whichtoestablishxenograftmodelsofBurkittLymphoma.Whenthetumor’sshorterdiameterwasmorethan0.40cm,themodelin

8、gwassuccessful.②Aftersuccessfulmodeling,18nudemicewere