lxrs在lps诱导thp-1巨噬细胞微粒产生中的作用及机制

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2、醉学）’＇＾一，Ｖ研究方向：急性肺损伤．护ｉ．一＇Ｉ，．＇皆．／所在学院；第二临床学院：，一，－‘々？＇＇．Ｖ－ｒＶ：；语－＇一〇五年五月．反Ｌ二Ｗ，古；巧；．＇Ｖ＼．批＇－’＇＇＇＇■’－－．．心主■＇枉－二‘＇片占ｒ．中、说：．、’＇啤户‘＇＇．．巧Ｖ巧巧常ｆ皆＼誠，去杂孝４掌ＬＸＲｓ在ＬＰＳ诱导ＴＨＰ－１巨唾细胞微桓产生中的作巧及机制论文作者签名：凌指导教师签名；１一论文评阅人

3、：陈萍，教授，硕导，軍庆医科大学附医院评阅人２：闻红，副教授，硕导，第Ｈ军医大学大坪医院答辩委员会主席：徐经大，教授，硕导，南华大学附属第二医院１委；员二，，硕导，中南医院王亚平教授大学湘雅委２；贯何振华院，教授，硕导，南华大学附属第二医一３委：员玲，主任医师，南华大学附属第院胡啸医４委员二医；何云武，主任医师，南华大学附属第院：５７日２０１５年月１日答辩期LXRs在LPS诱导THP-1巨噬细胞微粒产生中的作用及机制摘要研究背景：ALI/ARDS是临床上常见的危重症，过度的

4、炎症反应是ALI/ARDS的特征性表现之一，微粒是炎症反应的重要生物学标志物，在ALI/ARDS的发生发展中起着重要作用。巨噬细胞在ALI/ARDS时迅速增加，并且对其产生重要影响。肝X受体能够减轻ALI/ARDS及其炎症反应，但是其具体机制尚不清楚，进一步研究其机制对于ALI/ARDS的防治具有重要意义。目的：通过体外细胞实验，观察肝X受体在LPS诱导的THP-1巨噬细胞微粒产生过程中的作用以及微粒浓度与THP-1巨噬细胞炎性反应的关系。方法：1、先用PMA100nM刺激THP-1巨噬细胞贴壁,更换新鲜

5、培养基再用LXRs激动剂T0901317（0μM、5μM、10μM、20μM）预处理THP-1巨噬细胞，6h后更换新鲜培养基,然后用0.1μg/ml的LPS培养细胞24h，采用westernblot免疫印迹检测TLR4蛋白的表达、ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-1β的表达和微粒浓度(以磷脂酰丝氨酸浓度表示)。2、先用PMA100nM刺激THP-1巨噬细胞贴壁,更换新鲜培养基再用LXRs激动剂T0901317（10μM）预处理THP-1巨噬细胞（0h、6h、12h、24h），再次更换新鲜培养基后用

6、0.1μg/ml的LPS培养细胞24h，采用westernblot免疫印迹检测TLR4蛋白的表达、ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-1β的表达和微粒浓度(以磷脂酰丝氨酸浓度表示)。3、先用PMA100nM刺激THP-1巨噬细胞贴壁,更换新I鲜培养基后将THP-1巨噬细胞分别进行空白对照处理、LXRs激动剂（10μM）处理、TLR4抑制剂TAK-242（3μM）处理，6h后再次更换新鲜培养基，用0.1μg/ml的LPS培养细胞24h，采用westernblot免疫印迹检测TLR4蛋白的表达、ELIS

7、A检测TNF-α、IL-6、IL-1β和微粒浓度(以磷脂酰丝氨酸浓度表示)。结果：1、LXRs激动剂T0901317能显著抑制THP-1巨噬细胞TLR4蛋白、TNF-α、IL-6、IL-1β的表达以及微粒的产生，并具有浓度依赖关系。与0μM组相比，LXRs激动剂T0901317在5μM时即有显著作用，且随着LXRs激动剂浓度增加抑制作用也增强，20μM组LXRs激动剂对TLR4蛋白、TNF-α、IL-6、IL-1β的表达以及微粒的产生抑制作用最为显著（P<0.001）。2、LXRs激动剂T0901317能

8、显著抑制THP-1巨噬细胞TLR4蛋白、TNF-α、IL-6、IL-1β的表达以及微粒的产生，并且在24h内具有时间依赖关系。与0h组相比，LXRs激动剂T090131710μM处理6h时即有显著作用，且随着LXRs激动剂作用时间延长抑制作用也增强，24h组LXRs激动剂对TLR4蛋白、TNF-α、IL-6、IL-1β的表达以及微粒的产生抑制最为显著（P<0.001）。3、THP-1巨噬细胞微粒浓度与TLR4蛋白表达水平以及T