大肠杆菌的培养和分离

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1、大肠杆菌的培养和分离1、微生物病毒细菌放线菌真菌原生动物一、微生物的基础知识(1)定义(2)种类(3)用途2、菌落（1）概念（2）菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落细菌的菌落特征因种而异3、培养基（1）成分细菌培养：蛋白胨、酵母提取液、氯化钠霉菌培养：无机物或添加蔗糖的豆芽汁（2）种类分离(纯化)细菌、保存菌种固体培养基液体培养基凝固剂琼脂作用扩大培养细菌液体培养基：表面生长均匀混浊生长沉淀生长固体培养基：菌落，菌苔4、生活环境霉菌：中性偏酸细菌：中性偏碱二、无菌技术1.无菌操作的目的防止培养基被其他微生物污染(及避免操作者被微生

2、物感染)2、无菌技术包括(1)将实验器具和培养基：高压蒸汽灭菌(2)接种环(针)、试管口:灼烧灭菌(3)实验操作空间：酒精+紫外线消毒（接种室(箱)、超净工作台）(4)双手:酒精消毒(5)实验操作应在酒精灯火焰旁进行(6)避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。(7)棉塞(封口膜):只让空气通过，而空气中的微生物不能通过。灼烧灭菌高压蒸汽灭菌锅（１）消毒定义：利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。3.消毒与灭菌（2）灭菌的定义：以化学剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌

3、之过程。灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。三、分离细菌方法2、涂布分离法1、划线分离法★1、划线分离法2、涂布分离法2、涂布分离法2、培养：在LB液体培养基上扩大培养四、大肠杆菌的培养和分离1、大肠杆菌(1)特性：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌(2)用途：基因工程技术中被广泛采用的工具3、分离灭菌↓倒平板↓培养↓划线分离LB液体和固体培养基及培养皿高压蒸汽灭菌将固体培养基倒入4个灭菌后的培养皿中，制备平面培养基在装有液体培养基的三角瓶中接种大肠杆菌，培养12h平板划线法培养皿倒置，37℃恒温培养12~2

4、4小时倒平板技术倒平板操作接种到固体斜面培养基，菌落长成后，置于4℃冰箱保存。4、保存菌种微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养