3.2《月季的花药培养》+课件

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1、课题2月季的花药培养课题2月季的花药培养一、课题目标：说出被子植物花粉发育的过程及花药培养产生花粉植株的两种途径，说出影响花药培养的因素，学习花药培养的基本技术，尝试用月季或其他植物的花药进行培养。二、课题重点和难点：选取适宜的培养材料和培养基。三、技能目标：知道被子植物花粉发育的过程；说出产生花粉植株的两种途径；记住影响花药培养的因素，尝试花药培养的实验操作过程，并进行无菌操作；知道花药培养在育种上的意义。高度不育，秋水仙素处理，染色体加倍后可育可育可育性有性生殖无性生殖生殖方式单倍体植株正常植株培养结果影响因素操作流程生殖细胞体细胞外

2、植体细胞类型脱分化→再分化脱分化→再分化基本过程细胞的全能性细胞的全能性理论依据月季的花药培养菊花的组织培养花的结构基础知识一、被子植物的花粉发育阅读课本P37～P40一、被子植物的花粉发育雄蕊：花丝花药：囊状结构，内有很多花粉粒花粉是小孢子母细胞经过减数分裂而形成的，因此，花粉是单倍体的生殖细胞。花粉的发育要经历：四分体时期、单核期、双核期花粉发育过程减数分裂有丝分裂注意：①二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞核和生殖细胞核。（精子在花粉管中形成）②三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖细胞进行一次有丝分裂，形成两个精子，这样

3、的花粉在成熟时，含有一个营养核和两个精子。③两个精子和一个营养核的基因型相同。④1花粉母细胞4个小孢子减分有分4个花粉管细胞核4个生殖细胞核有分8个精子小孢子母细胞（2n）小孢子时期（n）四分体时期（n）双核期4个生殖细胞核（n）4个花粉管细胞核（n）4个生殖细胞（n）4个营养细胞（n）4×2个精子(n)有丝分裂减数分裂单核期（n）有丝分裂练习：①写出花粉的发育过程的发育过程（学生板书）②假如一种生物体细胞有２０条染色那么它的小孢子母细胞、小孢子、花粉管细胞核、生殖细胞核各有多少条染色体？如果小孢子母细胞的基因型为AａBｂ（两对基因位于两

4、对同源染色体上）那么小孢子、花粉管细胞核和生殖细胞核的基因型是什么？答案：小孢子母细胞→４个小孢子→单核居中期→单核靠边期→花粉粒答案：２０、１０、１０、１０，AB或Aｂ或ａB或ａｂ。无论哪一种，来源于同一个小孢子的花粉管和生殖核的基因一定相同二、产生花粉植株的两条途径花粉花粉胚状体愈伤组织丛芽丛芽生根移栽脱分化分化再分化诱导胚状体1、材料的选择2、培养基的组成（MS培养基+不同比例的激素）3、亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以及接种密度等对诱导成功率都有一定影响三、影响花药培养的因素影响花药培养的因素1、材料的选择：⑴不同种类植物的

5、诱导成功率不同。⑵同一种植物，亲本植株的生理状况对诱导成功率有直接影响。⑶合适的花粉发育时期：花期早期时的花药最佳。⑷选择最合适的花粉发育时期①不选择单核期之前花药原因：花药质地幼嫩，容易破碎；②不选择单核期之后花药原因：花瓣开始松动，给材料消毒带来困难困难；③挑选单核期花药方法：应当选择完全未开放的花蕾，菌少，易消毒。2、培养基的组成花药培养所采用的培养基各成分中植物生长调节剂的水平和配比起决定作用。⑴诱导愈伤组织或胚状体产生的培养基：广泛使用2，4-D、IAA和KT；⑵诱导分化的培养基常除去2，4-D而以IBA或BA等代之。3、其他因

6、素：材料的低温处理、接种密度、培养的环境条件等对诱导的成功率都有一定的影响。实验操作一、材料的选取二、材料的消毒三、接种和培养（一）材料的选取1、选择花药一般通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。2、确定花粉发育时期最常用方法：醋酸洋红法；焙花青－铬矾法。实验操作鉴定花粉：①最常用的方法是醋酸洋红法：花药（载玻片上）→1%的醋酸洋红1滴→用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成红色）②某些植物的花粉细胞核不易着色，需要采用焙花青—铬钒法：花药（在卡诺氏固定液中处理20min）→取出，置于载玻片上→焙花青－铬钒溶液染

7、色→盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成蓝黑色）注：花粉细胞核内有染色体，染色体主要由DNA和蛋白质组成，醋酸洋红为碱性染色剂，染色体容易被染色。通过染色，可以确定细胞核为单核期还是双核期，是单核居中期还是单核靠边期。一般单核靠边期的花药培养成功率最高。（二）材料的消毒1、花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒2、无菌水清洗3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分4、放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2～4分钟（也可质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液）5、无菌水冲洗3～5次用于培养花药，实际上多数未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或颖片

8、保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。花蕾（70％酒精）大约30s（无菌水）清洗（无菌吸水纸）吸干水分（0.1％氯化汞溶液）2～4min（无菌水）冲洗（三）接种和培养灭菌后