标准曲线与回收试验

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1、标准曲线及回收实验Nelson—Somogyi法测定血糖注意事项：1、加入少量液体，要垂直送至管底。2、取混浊液体，先混匀。制备血滤液未知管回收管H2O1.51.0全血0.10.1标准糖---0.5枪式移液器的使用！1、混匀！加入4.5%Ba(OH)20.2ml，充分混匀！静置至变褐色（至少15分钟）。2、加入5%ZnSO40.2ml，混匀！静止5分钟。3、离心，3000ｒｐｍ，10分钟。按顺序加试剂，立即混匀，试管要干净、干燥！！！目的要求1了解标准曲线及回收实验的作法及意义。2掌握血滤液的制备。3掌握测定血糖的方法——Nelson-Somogyi二氏法。血液中的糖主要是

2、葡萄糖，即血糖测定血糖含量是判断糖代谢正常与否的一项重要指标，为临床化验常作的分析。本法是基于葡萄糖的还原性。由于血液中存在的大量蛋白质对测定有干扰，必需先去除蛋白质，制备无蛋白血滤液。全血+Ba(OH)2+ZnSO4蛋白质+非糖还原物+上清液（G）GCu(OH)2Cu2O砷钼酸钼兰颜色深浅与葡萄糖含量成正比其他还原性物质(主要是谷胱甘肽、葡萄糖醛酸、尿酸等)与Folin－吴法比较优点：一、测定血糖值接近真实值去除了血液中的其他还原物质，Folin－吴法用钨酸法沉淀血样中的蛋白质，不能去除这些还原物质，比真正的还原糖值高。正常值：Folin－吴法：80～120mg/dl，Nelso

3、n—Somogyi法：65～110mg/dl二、最后获得的比色物较为稳定采用砷钼酸代替Folin－吴法的磷钼酸，使，可放置较长时间（24小时以上）而不影响测定结果。三、可不用血糖管Nelson—Somogyi法所用碱性铜溶液中含有大量的NaSO4产生大量离子对溶入的气体产生盐析效应，以减少溶液中溶解的空气中的氧，从而减少了生成的Cu2O的再氧化。血糖管的目的：缩小与空气接触的面积，防止了空气中的氧对生成的Cu2O的再氧化，以免影响结果。标准曲线用不同浓度的标准糖溶液，按测糖方法进行光度法测定，读出不同浓度糖溶液的相应吸光度；以吸光度为纵座标，以糖浓度为横座标，绘出一曲线，此曲线即称

4、为标准曲线。1、找出该方法的可测范围2、标准曲线又叫工作曲线，当用同一方法，同一光度计及波长时可用标准曲线直接求出末知样品的含量回收实验在对一未知样品测定时，设两个管未知管：未知样品回收管：未知样品＋已知标准样品回收率＝M回-M未/已知标准样品量×100%理论值为100％，由于实验方法，操作等因素100±10％回收实验的目的1、验证方法的可靠性，在操作过程中样品是否有丢失，破坏，其他成分是否有干扰。2、校正测得值：若采用此方法，可用回收率校正测得值，使之接近真值。校正值（真值）＝测得值÷回收率制备血滤液未知管回收管H2O1.51.0全血0.10.1标准糖---0.51、混匀！加入4

5、.5%Ba(OH)20.2ml，充分混匀！静置至变褐色（至少15分钟）。2、加入5%ZnSO40.2ml，混匀！静止5分钟。3、离心，3000ｒｐｍ，10分钟。按顺序加试剂，立即混匀，试管要干净、干燥！！！其余步骤见讲义。各管中分别加入砷钼酸试剂1ml，轻轻混匀至无气泡(CO2)产生，将各管分别加蒸馏水7.0ml，小心的吹打混匀。结果处理回收率=（M回-M未）×2/0.50.1×0.5×100%血糖浓度mmol/L=M未×2/0.50.1×1000180血糖含量（M未）=A标2×0.5×0.1A未mg真值=测值÷回收率血糖浓度标准曲线5.5511.1116.6722.22mmol/

6、L标准曲线查得结果结果要求1、用座标纸绘制血糖的标准曲线。2、计算血糖测定方法的回收率。3、根据公式求出血糖浓度(mmol/L)，并根据回收率求出血糖浓度的真值。（公式）4、利用标准曲线求出血糖浓度(mmol/L)。讨论影响回收率的因素有哪些？