实验一abo正反定型及rh定型、唾液血型物质检测

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1、ABO血型鉴定、Rh血型鉴定临床检验基础与输血教研室唾液中HAB血型物质测定实验一ABO、Rh血型鉴定目的：掌握ABO正反定型的原理、方法及Rh血型鉴定原理：通常利用红细胞凝集试验，通过正定型和反定型鉴定ABO血型。正定型是用已知血型特异性抗体（抗-A、抗-B、抗-D…等分型血清）来测定红细胞上有无相应的抗原；反定型是用已知血型试剂红细胞测定血清中有无相应的抗体。器材:小试管、滴管、试管架、离心机、鉴定纸板、载玻片、记号笔、显微镜。试剂:1.ABO血型抗体：抗A、抗B；Rh血型抗体：抗D、抗C、抗c、抗E、抗e。2．3％～5％A型、B型及O型试剂红细胞。3.生理盐水

2、。标本:抗凝静脉血操作（试管法）(1)标记试管：正定型：取洁净小试管2支，分别标明－A、－B；反定型：取3支小试管分别标记Ac、Bc、Oc。(2)配5%悬浮红细胞：取静脉血2滴于小试管中，加2ml生理盐水，混匀，2500r/min离心3分钟，弃上清；重复3次。取管底1滴压积加19滴生理盐水，即为5%悬红。(3)加样：正定型管中分别加入1滴试剂和1滴悬红，反定型管中分别加入2滴血清和1滴试剂红细胞。（4）离心：3000r／min离心15秒（1000g）。(5)结果：轻摇试管,观察有无凝集或溶血现象。操作：玻片法(鉴定纸板)(1)洁净玻片(鉴定纸板)一张。标－A、－B，

3、分别用滴管滴加－A、－B试剂1滴，再加受检者3％～5％红细胞悬液l滴，混匀。(2)另取洁净玻片(或鉴定纸板)一张。标Ac、Bc、Oc，各加受检血清2滴，再分别滴加Ac、Bc、Oc悬红1滴。(3)室温轻转动玻片(或鉴定纸板)，使血清与细胞充分混匀连续约2min，肉眼观察凝集(溶血)反应。玻片试验时可用低倍镜观察结果。表lABO血型正反定型结果试剂血清+受检红细胞受检血清+试剂红细胞（正定型）（反定型）-A-B受检血型AcBcOc＋－A－＋－－＋B＋－－－－O＋＋－＋＋AB－－－注意事项1.试剂2.悬红3.蛋白4.溶血5.冷抗体6.老年、儿童7.污染作业简述ABO血型鉴

4、定正反不一致的原因4+红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。3+红细胞凝集成大小块，血清清晰。2+红细胞凝块分散成许多小块，血清清晰。l+肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。±镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。mf混合凝集外观（mixedfield）指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。－表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。红细胞凝集强度判断标准目的掌握Rh血型鉴定的原理、方法。原理Rh血型系统，包括四十几个抗原，通常使用相应的抗C、抗c、抗D、抗E、抗e五种Rh分型血清来检查红细胞抗原。在临床输血中一般只做D抗原的鉴定，被检红

5、细胞和抗D血清凝集者为Rh阳性，不凝集者为Rh阴性。二、Rh血型鉴定器材小试管、滴管、试管架、记号笔、载玻片、显微镜、离心机。试剂1.Rh抗血清：常用的为IgM抗D。2.己知Rh阳性和阴性的5％红细胞悬液各1份3.盐水溶液。标本静脉血。操作(盐水试管测试法)1.取单克隆抗-D（IgM）-C、-c、-E、-e试剂各1滴到5支试管中。2.每管各加1滴3％～5％待检红细胞悬液。3.充分混匀，以1000g离心15秒。4.观察结果：轻摇散开试管底部的细胞扣，用肉眼观看凝集。5.判定结果注意事项1．如临床上只检查是否为Rh阳性，只需用抗D血清进行鉴别，如结果为阴性，应进一步检查

6、排除Du型。2．因抗e血清难以得到，故临床上常用四种Rh抗血清来定型。3．Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体凝集反应块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻摇动试管，不可用力振摇。4．如鉴定结果只与抗D血清起反应，而与抗C、-c、-E、-e都不凝集，则受检者为Rh缺失型，以-D-表示。唾液中HAB血型物质测定【目的】了解唾液HAB血型物质测定的原理、方法。【原理】HAB血型物质也存在于某些人的分泌液中。唾液中HAB血型物质为半抗原，能特异性地与相应抗体结合，从而抑制抗体与相应红细胞发生凝集。所以利用凝集抑制试验，可测定唾液中HAB血型物质，它有助于ABO亚

7、型的分类及其特殊情况下血型的鉴定【器材】小试管、滴管、试管架、记号笔、离心机【试剂】1.５％A、B和O型红细胞盐水悬液。2.最适稀释度抗血清的制备（标化血清）【标本】受检者唾液1.被检者漱口后留取自然流出的唾液2ml，将留取的唾液1000g离心，取上清液置于大试管中，煮沸10min，再离心10min，留取上清液备用。2.排列试管3支，分别标明-A、-B、-H，3管各加唾液1滴，每管加相应标化血清1滴。3.混匀，置室温，中和10min。4.每管加相应悬红1滴.5.混匀，离心15秒，观察结果.标化血清1.标记试管：3排18支，分别抗A、抗B及抗H。每排再标2、4、8